【摘 要】
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该论文采用改进的溶胶-凝胶法固化脱氢酶(醇脱氢酶、醛脱氢酶和酸脱氢酶),并对制得的生物催化剂性质及其应用进行研究.首先采用溶胶-凝胶法分别对三种脱氢酶进行包埋,并比较
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该论文采用改进的溶胶-凝胶法固化脱氢酶(醇脱氢酶、醛脱氢酶和酸脱氢酶),并对制得的生物催化剂性质及其应用进行研究.首先采用溶胶-凝胶法分别对三种脱氢酶进行包埋,并比较了三种游离醇和固定化酶的动力学.实验结果表明,三种固定化酶酶促反应与游离酶酶促反应都符合Daziel基于Michaelis-Menten方程提出的双底物(BiBi)酶促反应动力学模型,三种酶的催化活性和选择性都能保持.固定化后,酸脱氢酶(F<,ate>DH)、醛脱氢酶(F<,ald>DH)和醇脱氢酶(ADH)的酶活分别为游离酶的50-70﹪、55-65﹪、40-50﹪.三种酶促反应的米氏常数也相应增大,亲合力降低.在凝胶过程的不同阶段分别加入酸和碱两种催化剂,可以加快凝胶化速率,并且改善凝胶材料的性质.通过吸附检测,含酶凝胶的孔径分布主要集中在3.2-3.5nm之间;通过透射电镜观测,酶在凝胶中分布均匀;利用紫外-可见分光光度计检测,酶固定化后空间结构能够保持完好.同时通过理论方法拟合了醇脱氢酶酶促反应动力学方程,理论拟合以及实验得到最大表观反应速率分别为0.40s<-1>和1.68s<-1>,而两种方法得到的米氏常数吻合较好.
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