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本论文实验分为三个部分:
实验一:乳腺癌是女性中常见的恶性肿瘤之一。揭示乳腺癌发病机理,可能要寻找新的乳腺癌相关分子、信号通路、细胞联系及调节机制等作为切入点。本研究采用SSH,以小鼠乳腺癌组织为实验方、正常乳腺组织为驱动方,进行差异筛选。构建了基因差别表达文库,得到30个差异片段,分别对应Genbank中14个已知基因序列。其中产物已知的有10个;产物未见报道的有4个。从中选取了3个基因片段tmem55A、MMP19和G12,分别检测了它们在肝、脾、肺、肾、肌肉、乳腺以及肿瘤等组织的表达。Tmem55A在各组织中都有表达;MMP19在乳腺组织不表达,肝中高表达;G12在乳腺组织不表达,在肿瘤、肝、脾、肾中高表达。这些筛选的基因,为进一步研究乳腺癌发生、发展、转移的相关机制提供了一些新的出发点。
实验二为了探讨TGF-β1在母胎免疫调节过程中的作用,本研究以SD大鼠作为实验材料,采用了WesternBlotting和免疫荧光等方法,研究了妊娠不同时期,大鼠子宫和胎盘中Fas、FasL、bcl-2、bax等凋亡相关分子表达的时空变化,以及TGF-β1对这些分子表达的调节。主要结果如下:
1、正常妊娠子宫,Fas在D4、D19较高,D9略有下降。FasL在D4高表达,D19表达量最低。Bax/Bcl-2的比值,D4达到最大值。
正常妊娠胎盘,Fas在D9表达量高,D19最低。FasL在D9表达量最高,D15最低。Bax/Bcl-2比值,在D9、D15较高,D19有所下降。
2、宫角注射超生理剂量TGF-β1,可以调节Fas/FasL系统在子宫、胎盘的时空表达特性。并影响不同时期子宫、胎盘的凋亡状态。
实验三为了检测SARS-CoⅤ的结构蛋白M和N,是否可以诱导细胞凋亡,选取了人胚肺成纤维细胞(HPF)作为研究材料,分别转染含有M或N基因片段的质粒(pcDNA3.1-M、pcDNA3.1-N),并采用TUNEL、Hoechst33342核染色以及形态学观察等方法进行凋亡检测。结果发现,在无血清的条件下,约有16.34%转染了M的细胞和21.72%转染了N的细胞呈现出典型的凋亡特征,这与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。而且,共转染M和N的细胞有更明显的细胞死亡现象(约为36.03%),这与转染了M或N的细胞具有显著性差异(P<0.01)。这表明M、N蛋白可以诱导HPF细胞凋亡。M、N的共转染,可以显著增强凋亡效果。SARS-CoⅤ的结构蛋白在细胞病理过程中,可能发挥重要作用。