论文部分内容阅读
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)在哺乳动物卵母细胞成熟过程中发挥着重要的作用。对猪卵母细胞而言，MAPK是否参与了减数分裂的恢复还不清楚。我们采用高速离心的方法使猪卵母细胞生发泡(germinalvesicle，GV)清晰可见，据此把即将发生生发泡破裂(germinalvesiclebreakdown，GVBD)的卵母细胞和刚发生生发泡破裂的卵母细胞分开，分别检测它们当中MAPK的活性。结果表明，在自发成熟模型、抑制-诱导成熟模型和正常成熟模型中，卵母细胞中MAPK的磷酸化发生在GVBD之后。我们发现卵丘细胞而非卵母细胞中MAPK的激活对卵丘包裹的卵母细胞的GVBD是必需的。此外我们还利用细胞类型特异性的磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)抑制剂研究了卵丘细胞中环磷酸腺苷酸(cyclicadenosine3’，5’monophosphate，cAMP)和MAPK的对话。结果表明PDE3亚型存在于卵母细胞中而PDE4亚型存在于卵丘细胞中。在卵母细胞中抑制PDE3的活性可以诱导cAMP水平的升高，从而阻碍GVBD的发生；与此相反，在卵丘细胞中抑制PDE4的活性可以诱导cAMP水平升高从而激活MAPK信号通路并诱导GVBD的发生。表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)可以促进体外培养的猪卵母细胞减数分裂恢复。我们分析了MAPK在EGF诱导的猪卵母细胞减数分裂恢复过程中所发挥的作用及机制。结果表明，EGF可以浓度依赖性地诱导卵丘包裹的卵母细胞发生GVBD，而并不能促进裸卵发生GVBD。EGF受体(EGFreceptor，EGFR)的特异性抑制剂AG1478可以有效抑制EGF诱导的GVBD。EGF可以在培养初期迅速激活卵丘细胞中的MAPK。MAPK的上游激酶MEK的特异性抑制剂U0126可以有效抑制EGF诱导的卵丘细胞中MAPK激活，同时也阻止了EGF诱导的卵母细胞减数分裂恢复。AG1478也可以有效抑制EGF诱导的卵丘细胞MAPK发生磷酸化。以上结果表明EGF是通过卵丘细胞中EGF受体促进卵子减数分裂恢复的，活化的EGF受体通过卵丘细胞中MAPK信号通路诱导卵母细胞发生GVBD。