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第一部分老年人热休克蛋白60及抗体与冠心病和牙周炎关系的研究目的：研究老年人热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白60IgG(HSP60IgG):和牙龈卟啉单胞菌热休克蛋白60IgG(P.gHSP60IgG)与冠心病及牙周炎之间的关系,为了解冠心病新的危险因素提供理论依据。方法：入选2012年9-10月天津医科大学第二医院老干部查体患者共160例,分为四组,即健康对照组、冠心病组、牙周炎组、冠心病合并牙周炎组,每组各40例,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组HSP60、HSP60IgG、P.gHSP60IgG的浓度,同时完善一般生化指标如肝肾功能、血脂等的检查。结果：1.冠心病组、牙周炎组、冠心病合并牙周炎组人HSP60、人HSP60IgG、 P.gHSP60IgG浓度明显高于健康对照组(P<0.05),冠心病合并牙周炎组上述指标亦高于冠心病组和牙周炎组,牙周炎组P.gHSP60IgG浓度显著高于冠心病组(P<005),但冠心病和牙周炎组人HSP60、人HSP60IgG浓度无明显差异(P>0.05)。2.冠心病组女性HSP60浓度明显高男性(P<0.05),牙周炎组女性P.gHSP60IgG浓度明显高于男性(P<0.05),冠心病合并牙周炎组女性HSP60IgG、P.gHSP60IgG浓度亦明显高于男性(P<0.05)。3.各组间人HSP60、人HSP60IgG和P.gHSP60IgG浓度随年龄增加有逐渐升高的趋势,其中以80岁为界限,冠心病组、牙周炎组和冠心病合并牙周炎组≥80岁患者人HSP60浓度比<80岁患者明显升高(P<0.05),冠心病合并牙周炎组>80岁患者人HSP60IgG和P.gHSP60IgG浓度比<80岁患者明显升高(P<0.05),牙周炎组≥≥80岁患者P.gHSP60IgG浓度比<80岁患者有所升高,但无显著性差异(P>0.05)。4.随着体重指数(BMI)的升高各组间人HSP60、人HSP60IgG、P.g HSP60IgG浓度逐渐升高,冠心病合并牙周炎组BMI>30超重患者人HSP60、人HSP60IgG浓度较其他各组超重患者明显升高(P<0.05)。5.冠心病合并牙周炎组吸烟患者人HSP60浓度明显高于非吸烟患者(P<0.05),但其他各组显示吸烟对人HSP60、人HSP60IgG和P.g HSP60IgG浓度影响不大(P>0.05)。6.饮酒对冠心病组、牙周炎组、冠心病合并牙周炎组人HSP60、人HSP60IgG影响较大,饮酒组的人HSP60、人HSP60IgG均明显高于非饮酒组(P<0.05)。7.冠心病合并牙周炎组血脂水平低于其他各组,但人HSP60、人HSP60IgG和P.g HSP60IgG水平却明显升高(P<0.05)。8.经偏相关分析显示：在控制年龄、身高、体重、吸烟史、饮酒、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等因素后,人HSP60和人HSP60IgG呈正相关(r=0.705, P<0.01), P.gHSP601gG和人HSP60IgG呈正相关(r=0.825,P<0.01)。9.校正传统的危险因素,年龄、性别、吸烟状态、BMI后,经多元Logistic回归分析显示：P.gHSP60IgG和人HSP60IgG是CHD的危险因素之一(P<0.05)。结论：人HSP60及人HSP60IgG、P.gHSP60IgG可能在冠心病和牙周炎之间起一定的桥接作用,患牙周炎的老年人可能更易发生冠心病,除了结合心电图、临床症状和冠脉造影检查可明确外,适时测定人HSP60、人HSP60IgG和P.gHSP60IgG浓度可能对评估牙周炎患者是否易于合并冠心病有指导意义,因此老年人注意牙周卫生、及时治疗牙周炎可能有助于预防冠心病。第二部分牙龈卟啉单胞菌热休克蛋白60干预人脐静脉内皮细胞的研究目的：观察牙龈卟啉单胞菌热休克蛋白60(P.gHSP60)以不同浓度及时间干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,HUVEC表达内皮型钙粘蛋白(VE-cadherin)、一氧化氮合酶(eNOS)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化及细胞增嫡和凋亡的趋势,明确P.gHSP60致HUVEC功能障碍的具体机制。方法：P.gHSP60分别以10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL不同浓度干预HUVEC后,在2小时、6小时、12小时、24小时用Western bloting、PCR、MTT比色法和Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术等方法从细胞蛋白表达,基因表达及细胞增殖和凋亡各层面了解HUVEC功能障碍及增殖与凋亡的情况。结果：1. P.gHSP60以10pg/mL浓度干预HUVEC时,各种蛋白表达量随时间变化未见明显变化；P.gHSP60以100pg/mL浓度干预HUVEC时,VE-钙粘蛋白、eNOS蛋白在干预24小时表达开始减少,Caspase-3蛋白表达开始增加；P.gHSP60浓度加大至1ng/mL干预HUVEC后6小时即诱导VE-钙粘蛋白、eNOS蛋白表达减少,Caspase-3及其活性形式蛋白表达增加。P.gHSP60干预HUVEC VE-钙粘蛋白、eNOS蛋白表达呈浓度和时间依赖性方式降低,Caspase-3蛋白表达则呈相反趋势。2. P.gHSP60以10pg/mL浓度干预HUVEC时,VE-钙粘蛋白mRNA表达量随时间变化未见明显变化；P.gHSP60以100pg/mL浓度干预HUVEC时,VE-钙粘蛋白mRNA表达在干预12小时开始降低,当P.gHSP60浓度加大至1ng/mL干预HUVEC后6小时即诱导VE-钙粘蛋白mRNA表达减少,表现为浓度及时间依赖性方式改变。3.P.gHSP60不同浓度干预HUVEC24小时,随着浓度逐渐增加,细胞增殖能力逐渐降低。4. P.gHSP60不同浓度干预HUVEC24小时,随着浓度逐渐增加,细胞早期凋亡率逐渐增加。结论：P.gHSP60干预HUVEC时,VE-钙粘蛋白、eNOS、Caspase-3蛋白表达呈浓度依赖性和时间依赖性方式发生变化,VE-钙粘蛋白、eNOS蛋白表达逐渐降低,Caspase-3蛋白表达逐渐增加,细胞增殖能力逐渐降低,早期凋亡率逐渐增加。P.gHSP60对HUVEC呈浓度依赖性及时间依赖性产生影响,进一步导致细胞功能障碍,甚至使凋亡率增加,从分子生物学角度证明牙周炎患者易于发生动脉粥样硬化的机制。