【摘 要】
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本研究分别用EcoRⅠ+XhoⅠ和EcoRⅠ消化pWM和pDWB，得到1.3kb的原癌基因c-myc和0.9kb的凋亡抑制基因bcl-2，将这2基因分别插入逆转录病毒载体pLXSN5’-LTR下游的多克隆位点，构建了
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本研究分别用EcoRⅠ+XhoⅠ和EcoRⅠ消化pWM和pDWB，得到1.3kb的原癌基因c-myc和0.9kb的凋亡抑制基因bcl-2，将这2基因分别插入逆转录病毒载体pLXSN5’-LTR下游的多克隆位点，构建了2个重组表达质粒，命名为pLXSN-c-myc和pLXSN-bcl-2。经单、双酶切鉴定，所构建的2个质粒均正确。 将pLXSN-c-myc通过脂质体方法转染单嗜性包装细胞系Ψ-2，2天后收获培养上清，并以其继续感染双嗜性包装细胞系PA317，加浓度为325μg/mL的G418选择培养液进行阳性细胞克隆的筛选。9天后得到阳性克隆，取其培养液上清以不同的稀释倍数感染靶细胞系NIH3T3作初步的滴度测定，筛选到高滴度产毒细胞克隆V，其滴度为3.5×10~5CFU/mL。 扩大培养阳性克隆V，并大量制备含重组逆转录病毒的培养液，用差速离心法进行病毒的浓缩，最后对已浓缩的病毒原液作滴度测定，值为1.67×10~7CFU/mL，表明浓缩后病毒滴度提高50倍。
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