论文部分内容阅读
目的:构建新生SD大鼠急性肺损伤模型;动态检测急性肺损伤新生SD大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液中micro RNA-155和127的表达水平。方法:1、80只新生SD大鼠按随机数字表法分为LPS组(LPS 1mg组、2mg组、3mg组)和对照组,每组20只,分别给予腹腔注射1、2、3mg/kg LPS(用生理盐水稀释至0.2ml)和生理盐水0.2ml。于24h内观察各组新生SD大鼠一般情况后处死并取材。观测肺组织大体病理情况、病理评分、肺组织湿重/干重比值和放射状肺泡数的变化;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的水平;蛋白免疫印迹法检测肺组织中TNF-α和IL-6蛋白的表达。2、80只新生SD大鼠分组及给药方法同1,分别在1h、6h、12h和24h四个时间点取材。RT-PCR法检测肺组织和支气管肺泡灌洗液中miR-155和127的表达水平。结果:1、(1)新生大鼠一般情况:LPS组新生大鼠均出现活动减少、反应迟钝、嗜睡、呼吸频率增快和呼吸困难等表现。(2)肺大体观察:LPS组新生大鼠出现肺水肿、出血等病变,随着LPS剂量增加,病变程度越发严重。(3)肺组织病理评分:LPS组分别为1.91±0.11,2.78±0.16和5.19±0.49,与对照组相比,具有统计学意义(F=160.94,P<0.05);LPS组间比较,也具有统计学意义(P<0.05)。(4)肺组织中湿重/干重比值:LPS组分别为1.76±0.07,2.69±0.11和4.41±0.13,与对照组相比,具有统计学意义(F=292.54,P<0.05);LPS组间比较,也具有统计学意义(P<0.05)。(5)RAC计数:LPS组分别为10.88±0.32,6.00±0.46和2.81±0.24,与对照组相比,有统计学意义(F=201.73,P<0.05);LPS组间比较,也具有统计学意义(P<0.05)。(6)支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6水平:LPS组TNF-α水平分别为99.41±34.12,135.70±15.73和190.50±11.12,与对照组相比,有统计学意义(F=4.64,P<0.05);LPS组间比较,也具有统计学意义(P<0.05)。LPS组IL-6水平分别为2164.55±60.73,2287.36±187.22和2395.36±227.53,与对照组相比,LPS 3mg组具有统计学意义(P<0.05);LPS组间比较,也具有统计学意义(P<0.05)。(7)肺组织TNF-α和IL-6蛋白水平:LPS组TNF-α和IL-6蛋白表达均升高,随着剂量增加蛋白表达水平逐渐增加。2、(1)肺组织miR-155的表达:LPS 1mg组:miR-155在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.95±0.02,0.95±0.04,0.98±0.07和1.03±0.01;LPS 2mg组:miR-155在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.96±0.05,1.05±0.06,1.07±0.02和1.11±0.09;LPS 3mg组:miR-155在1h、6h、12h和24h的表达量分别为1.00±0.05,1.12±0.09,1.10±0.04和1.19±0.12。以上结果提示随着时间的延长miR-155表达逐渐增加。LPS组与对照组比较,有显著性差异(P<0.05);LPS组间比较,亦有显著性差异(P<0.05)。(2)肺组织miR-127的表达:LPS 1mg组:miR-127在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.82±0.02,0.80±0.02,0.77±0.04和0.73±0.02;LPS 2mg组:miR-127在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.74±0.03,0.70±0.04,0.67±0.01和0.60±0.05;LPS 3 mg组:miR-127在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.58±0.03,0.58±0.04,0.51±0.03和0.47±0.04。以上结果提示随着时间的延长miR-127表达逐渐降低。LPS组与对照组比较,有显著性差异(P<0.05);LPS组间比较,亦有显著性差异(P<0.05)。(3)支气管肺泡灌洗液中miR-155的表达:LPS 1mg组:miR-155在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.90±0.03,0.95±0.04,0.99±0.03和1.06±0.04;LPS 2 mg组:miR-155在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.94±0.04,0.96±0.02,1.03±0.03和1.11±0.04;LPS 3 mg组:miR-155在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.90±0.02,1.07±0.09,1.01±0.02和1.33±0.08。以上结果提示随着时间的延长miR-155表达逐渐增加。LPS组与对照组比较,有显著性差异(P<0.05);LPS组间比较,亦有显著性差异(P<0.05)。(4)支气管肺泡灌洗液中miR-127的表达:LPS 1mg组:miR-127在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.81±0.02,0.78±0.04,0.67±0.01和0.66±0.02;LPS 2mg组:miR-127在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.83±0.04,0.74±0.03,0.64±0.03和0.65±0.01;LPS 3 mg组:miR-127在1h、6h、12h和24h的表达量分别为0.82±0.05,0.82±0.06,0.67±0.01和0.64±0.01。以上结果提示随着时间的延长miR-127表达逐渐降低。LPS组与对照组比较,有显著性差异(P<0.05);LPS组间比较,亦有显著性差异(P<0.05)。结论:1、腹腔注射LPS可以制备新生大鼠ALI模型。2、miR-155和127可以作为潜在的辅助早期诊断新生儿ALI的标志物。