miRNA-22对老年鼠缺血性卒中功能恢复的影响及机制研究

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目的:  探讨miRNA-22是否能促进老年鼠缺血性卒中后神经功能恢复及其可能的免疫机制。  方法:  雄性老年SD大鼠(23-24月龄)通过远端大脑中动脉阻断术(distal Middle Cerebral ArteryOcclusion,dMCAO)建立局灶性缺血性脑卒中模型。大鼠随机分为给药组(n=9)和对照组(n=8),通过脑立体定位仪于梗死灶局部给药,给药组注射miR-22-3p(浓度1nmol/ml),对照组注射等量生理盐水。梗死后12小时第一次给药(20ul bid),共给药3天。造模后第1到3天进行平衡木实验(Beam balance test,BBT)、转角实验(Comer test,CT)、悬空旋转实验(Elevated body swing test,EBST),以此明确卒中大鼠肢体运动功能恢复情况;三天后处死老鼠。通过TTC染色对比给药组与对照组老年鼠脑梗死体积,流式细胞术检测梗死灶γδT淋巴细胞以及活化的小胶质细胞,ELISA检测梗死灶中IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子阿尔法(Tumor Necrosis Factor alpha,TNF-α)、降钙素基因相关肽(Calcitonin gene relatedpeptide,CGRP)的含量,以此探讨miR-22对老年大鼠卒中的影响及可能的免疫机制。  结果:  1.行为学检测结果:  ①平衡木实验结果:在术后第1天,给药组的评分优于对照组,存在统计学差异(P<0.05)。在术后第2天,给药组的评分较对照组优,差异存在统计学意义(P<0.05)。第3天,给药组评分较对照组仍然维持优势,差异存在显著统计学意义(P<0.01)。  ②转角实验:本次实验得分值一左转次数为基准,术后第2天,给药组评分较对照组稍差,但差异无统计学意义(P>0.05)。在术后第3天,给药组与对照组评分接近,差异无统计学意义(P>0.05)。  ③悬空旋转实验:本次实验计算右转百分比。在术后第一天,给药组比对照组更接近50%基准线,表明功能恢复情况更佳,差异有统计学意义(P<0.05)。在术后第2天,第3天,给药组改善情况较对照组仍然维持优势,差异存在统计学意义(P<0.05)。  2.脑梗死体积检测:给药组的梗死体积较对照组明显减小,差异存在显著统计学意义(P<0.05)。  3.流式细胞术检测结果:  ①梗死灶γδT淋巴细胞百分比:给药组梗死灶γδT淋巴细胞百分比远小于对照组梗死灶γδT淋巴细胞百分比,差异存在显著统计学意义(P<0.01)。  ②梗死灶活化的小胶质细胞百分比:给药组梗死灶活化小胶质细胞百分比远小于对照组梗死灶活化小胶质细胞百分比,差异存在统计学意义(P<0.05)。  4.ELISA结果:给药组梗死灶IL-4含量远高于对照组梗死灶,差异存在显著统计学意义(P<0.001)。虽然给药组梗死灶IL-6含量高于对照组梗死灶,但差异无统计学意义(P>0.05)。梗死灶IL-10含量高于对照组梗死灶,差异存在统计学意义(P<0.05)。梗死灶肿瘤坏死因子阿尔法TNF-α含量低于对照组梗死灶,差异存在显著统计学意义(P<0.001)。梗死灶CGRP含量给药组梗死体积远高于对照组,差异存在显著统计学差异(p<0.01)。  结论:  1.MiR-22可以改善老年鼠卒中后运动功能的恢复。  2.MiR-22可以减少老年鼠脑卒中后脑内炎性因子的分泌和炎症细胞的产生,并增加老年鼠卒中后脑内神经保护因子的分泌,进而减轻炎症反应。提示miR-22可以有效治疗老年鼠缺血性卒中。  3.血液内miR-22的减少可能是老年群体较青年群体更易发生缺血性卒中的原因之一。
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