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狄斯瓦螨(Varroa destructor)被认为是威胁全球蜂群健康的主要因素之一,对全世界的养蜂业都造成了巨大损失。中华蜜蜂作为蜂螨的原始寄主,具有较强的清理能力,能够抵抗螨虫的侵害。为探求中华蜜蜂抗螨行为的分子机制,本文以中华蜜蜂(Apis cerana cerana)为研究对象,通过对染螨前后的中华蜜蜂进行Solexa/Illumina高通量转录组测序,初步筛选出与中华蜜蜂抗螨行为相关的候选差异基因,并采用RT-PCR和荧光定量PCR的技术,分析了候选差异基因中mab-21和Calcineurin B在中华蜜蜂不同发育阶段的表达差异,并对候选基因进行序列及表达特征分析。主要结果如下:1、通过高通量测序技术检测染螨前后的中华蜜蜂转录组表达差异,将获得的clean reads从头组装获得31 739个Unigenes,平均长度为6 067bp,并对这些Unigenes进行基因功能注释。基于数据库Nr、GO和KEGG用Blast X进行相似性比对,共有29 792个Unigenes被注释。以未染螨中华蜜蜂转录组数据为参考数据,对染螨前后的中华蜜蜂进行分析比较,在染螨后的中华蜜蜂共检测到513个基因有显著表达差异,其中502个基因上调,11个基因下调。2、从中华蜜蜂转录组差异基因中筛选得到mab-21基因。采用RT-PCR方法,获得中华蜜蜂mab-21 c DNA,克隆了中华蜜蜂mab-21的基因编码区,命名为Accmab21,并提交Gen Bank后获得登录号KR000001。序列分析结果显示,中华蜜蜂mab-21基因的编码区开放阅读框长为1 098bp,共编码365个氨基酸,推测编码蛋白的相对分子量为41.63 k D,等电点为8.53。对mab-21的系统进化进行了分析,表明中华蜜蜂mab-21与西方蜜蜂(Apis mellifera)mab-21、小蜜蜂(Apis florea)mab-21和熊蜂(Bombus impatiens)mab-21聚成一支。3、对中华蜜蜂mab-21在不同发育时期(新出房蜂、哺育蜂、守卫蜂及采集蜂)工蜂头部中m RNA的表达量以及感染大蜂螨前后的表达特性进行了研究。Real-time PCR结果显示,mab-21基因在中华蜜蜂不同发育时期的工蜂头部均有所表达,其中哺育蜂阶段显著高于新出房蜂、守卫蜂和采集蜂(P<0.05)。感染大蜂螨后,哺育蜂和守卫蜂中mab-21基因的表达下降显著(P<0.05);而在新出房蜂和采集蜂中表达量变化不显著。该基因可能与中华蜜蜂抗螨行为相关。4、从中华蜜蜂转录组差异基因中筛选得到Calcineurin B基因。钙调磷酸酶B(Calcineurin B,Cn B)是钙调磷酸酶的调节亚基,钙调磷酸酶在动植物钙信号传导中起重要作用。采用RT-PCR方法克隆了中华蜜蜂Calcineurin B基因编码区。结果表明:该编码区开放阅读框(ORF)长为513 bp,可编码170个氨基酸残基,相对分子量为19.36 Da,等电点为4.33。同源性比较发现,中华蜜蜂Cn B的氨基酸序列与西方蜜蜂(A.mellifera)同源性最高,高达99.4%,与熊蜂(B.impatiens)、赤拟谷盗(Tribolium castaneum)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、家蚕(Bombyx mori)较高,分别为97.1%、97.6%、94.7%和96.5%。通过系统发育树分析可知中华蜜蜂与西方蜜蜂(A.mellifera)、大蜜蜂(A.dorsata)、小蜜蜂(A.florea)等膜翅目昆虫的Cn B汇成一支。5、对Calcineurin B基因在中华蜜蜂不同发育时期(新出房蜂、哺育蜂、守卫蜂及采集蜂)工蜂头部中m RNA的表达量以及感染大蜂螨前后的表达规律进行了研究。荧光定量PCR结果表明,Calcineurin B基因在中华蜜蜂工蜂头部的不同发育时期均有表达,各阶段表达量由高到低为:守卫蜂>采集蜂>哺育蜂>新出房蜂(P<0.05)。感染大蜂螨后,新出房蜂和哺育蜂中Calcineurin B基因的表达显著增加(P<0.05);而采集蜂中表达量显著下降(P<0.05);守卫蜂中表达量变化不显著。