论文部分内容阅读
目的：研究去甲斑蝥素(norcantharidin，NCTD)在体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat凋亡的作用及其相关基因livin表达量的影响 方法：1、细胞系Jurkat的体外培养：按悬浮细胞常规培养方法，细胞在含10％FBS的RPMI1640培养液中培养，每3～4天传代一次，取对数生长期细胞用于实验。2、NCTD抗Jurkat细胞系的体外实验研究：①倒置显微镜下观察不同浓度的NCTD作用于Jurkat细胞，分别于处理后6h、12h、24h、48h、72h5个时相点的细胞形态、密度及结构的变化；②MTT法测定不同浓度的NCTD作用于Jurkat细胞不同时间后对细胞增殖的影响；通过以上方法找出实验所需NCTD的最佳剂量及时间；③取NCTD作用的最佳剂量及时间与长春新碱对比：a.倒置显微镜下观察NCTD及VCR两种药物作用于Jurkat细胞，分别于处理后6h、12h、24h、48h、72h5个时相点的细胞形态、密度及结构的变化；b.MTT法初步测定NCTD及VCR两种药物作用于细胞72h后对细胞增殖抑制作用的影响；c.通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)对livin基因表达量进行检测，进一步探讨NCTD诱导Jurkat细胞株凋亡的机制。 结果：1.倒置显微镜下观察：对照组细胞生长状态正常，形态规则、分布密集：NCTD作用组细胞形态不规则，胀大、变形现象明显，分布稀疏，出现细胞大量死亡，且随着NCTD作用浓度的增大及时间的延长，细胞形态的改变越明显。2.MTT检测结果表明：NCTD(5-40mg/L)对Jurkat细胞均有增殖抑制作用，降低细胞存活率(P<0.05)，20mg/L与40mg/L的抑制作用无明显差异(P>0.05)，不同时间的抑制作用有明显差异(P<0.05)；增殖抑制作用呈现时间一浓度依赖关系，最佳浓度及时间在20mg/L，作用72h时。3.倒置显微镜下观察：NCTD及VCR作用组细胞形态出现不规则，胀大、变形现象明显，分布稀疏，大量细胞死亡，两者在相同时间点上对细胞的影响无明显差别。4.NCTD与VCR作用Jurkat细胞72h测MTT结果表明：NCTD与VCR两者对细胞与对照组相比均有抑制作用(P<0.05)，两者的抑制率相比无显著差异(p>0.05)，且两者联合可增加细胞增殖抑制率(P<0.05)。5.RT-PCR结果显示与对照组相比，NCTD组和VCR组均使livin基因的表达量下调(P<0.05)，并且两者联合可加强livin基因表达量的下调(P<0.05)。 结论：1.NCTD抑制Jurkat细胞株的增殖抑制作用具有时间，浓度依赖关系；2.NCTD与VCR对细胞增殖均有抑制作用，两者的影响无明显差异，且两者联合可增强对细胞的增殖抑制作用；3.NCTD的诱导细胞凋亡的机制可能与抑制livin的表达有关。