拟南芥叶发育突变体pyl1-1的分离及基因克隆

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叶发育是植物形态建成的重要方面。叶片发育的调控是一个复杂的过程,受到外界环境因子和内部基因的共同作用。近些年来,在模式植物拟南芥中已经鉴定了一些重要的叶片发育调控因子,但目前叶片发育过程中的调控网络仍不清楚。因此,利用相应突变体,研究其在叶片发育中的功能有助于揭示叶片发育的分子机制。本研究筛选并鉴定了叶黄化突变paleyellow leaf(pyl1-1),并对其进行了相关研究,主要结果如下:  1、利用EMS诱变Co1-0野生型种子,我们获得了一系列叶表型发生改变并能够稳定遗传的突变体。其中一个叶黄化突变体pyl1-1,表型特征为叶片黄化、叶边缘有缺刻、植株整体矮小。表型分析结果显示叶片大小、叶绿素含量、莲座叶数目等都小于野生型。  2、遗传分析表明pyl1-1突变体为单基因隐性突变。通过构建F2代分离群体,利用均匀分布于拟南芥5条染色体上的25个InDel标记对18个黄化表型的F2单株进行分析,我们把突变基因初步定位在5号染色体nga106和nga76两个标记之间。进一步利用这两个标记之间的33个InDel标记对2455个F2黄化单株进行分析,将突变基因定位到MRN17-CER439869和MY J24-5两个标记之间的约69 Kbp的区域。分析发现这个区域有15个候选基因。而RT-PCR结果显示其中一个基因的转录本比Co1-0野生型长。基因组测序分析揭示,在第四个内含子的剪切位点发生了一个从A到G的碱基突变,从而导致该内含子被转录,转录本变长。  3、将野生型的PYL基因与它自身的启动子一起转化到突变体进行互补实验。目前正在进行相关的表型分析。  4、PYL基因有5个外显子和4个内含子,编码一个258个氨基酸的蛋白。qRT-PCR结果显示PYL基因在拟南芥主要主要组织器官中都有表达,其中在叶片和花中表达量最大。
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