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红花又名红蓝花,别名有草红花、红花草、红花菜等,为菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥管状花,红花原产四川、云南等省,至今已有4000多年的栽培历史。红花为常用的传统的中药,具有活血通经、散瘀止痛之功效,药理实验表明红花能降低胆固醇、降血压等。近年来,人们对红花的化学成分、药理作用、临床应用等方面进行了较深入的研究。 红花的化学成分较复杂,主要富含黄色素和红色素,它们是醌式查耳酮类化合物。其中红花黄色素(SY)是含有多种有效成分的水溶性成分。目前从红花中先后分得黄酮类,聚乙炔类,吲哚类,甾族类,木质素类,脂肪酸,挥发油,烷基二醇类,有机酸类和甾醇类等化合物及红花中的主要色素成分等250多种。 红花在临床上主要以水煎液入药,故对其水溶性成分的研究十分重要。研究结果表明,红花提取物具抗血栓、抗心肌缺血、扩张血管及降血脂等多方面的药理作用。现代药理研究表明,红花的有效成分为黄酮类化合物,但以往红花药理研究所用的受试药物多为红花粗提物或杂质含量较高的红花黄色素(Safflor Yellow, SY),这些结果对说明红花有效部位及有效单体成分药效的客观性较差,因此本文将采用化学与药理学手段相结合的方法进行研究,利用ADP诱导血小板聚集实验和红细胞、血小板固相萃取结合HPLC实验,综合考虑探索研究红花的有效部位及有效单体,并对其进行质量分析,为研究红花的药效物质基础提供科学依据。 本文主要对以下几个方面进行研究: 1.选择用非极性大孔吸附树脂对红花整体化学成分进行分离,利用HPLC分析法,综合HPLC图谱及根据化学成分结构相似的原则,将红花药材提取液整体化学物质组拆分为6个交叉峰较少的子物质组,利用ADP诱导血小板体外聚集实验从中初步筛选出有效化学物质组。 2.结合课题组利用血小板固相萃取和红细胞固相萃取结合HPLC筛选实验结果和利用用ADP诱导血小板聚集实验结果,从有效物质组中筛选出与血小板、红细胞有结合的效应成分,并对其进行分离及结构鉴定。红花水和70%乙醇提取物利用非极性大孔吸附树脂DM-130、反相柱材料MDS-5、制备型HPLC及半制备型HPLC等分离纯化手段得到五个黄酮类化合物。通过波谱数据及与文献数据对照鉴定了三个化合物的结构,分别为6-羟基山萘酚-3,6-双氧葡萄糖苷、6-羟基山萘酚-3-芸香糖-6-葡萄糖苷、6-羟基山萘酚-3-O-葡萄糖苷。化合物1和化合物2的结构正在鉴定中。其中化合物6-羟基山萘酚-3-O-葡萄糖苷与血小板和红细胞都有较强结合,化合物1和6-羟基山萘酚-3-芸香糖-6-葡萄糖苷与红细胞有较强结合。 3.对红花中主要的五种黄酮类化合物羟基红花黄色素A、6-羟基山萘酚-3,6-双氧葡萄糖苷、6-羟基山萘酚-3-芸香糖-6-葡萄糖苷、6-羟基山萘酚-3-O-葡萄糖苷和红花黄色素B进行提取条件研究。 4.对不同产地的红花药材及不同生产厂家的红花注射液中五种黄酮类化合物羟基红花黄色素A、6-羟基山萘酚-3,6-双氧葡萄糖苷、6-羟基山萘酚-3-芸香糖-6-葡萄糖苷、6-羟基山萘酚-3-O-葡萄糖苷和红花黄色素B进行含量测定。