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目的：
1.采用Taqman-MGB探针技术，建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测Foxp3mRNA的方法。
2.对前列腺癌患者(PCa)、前列腺增生(BPH)患者、复发前列腺癌(PCaR)、治疗后前列腺癌患者(PCaT)及健康对照外周血单个核细胞(PBMCs)的Foxp3mRNA进行荧光定量检测并探讨Foxp3表达变化的意义。
方法：
1.Foxp3mRNA的FQ-RT-PCR方法建立：根据Genebank的Foxp3mRNA(NM_014009)序列，在Foxp3基因的外显子6和7之间设计一对引物和一条Taqman-MGB探针，优化反应体系。
2.标准品的制备：用pMD18-T载体与普通PCR扩增所得的Foxp3cDNA片段进行连接，构建重组质粒作为标准品，将标准品10倍倍比稀释后进行荧光定量PCR扩增，以拷贝数的自然对数为横坐标，循环域值(Ct)为纵坐标制作标准曲线。
3.方法学评价：包括该方法的灵敏性、特异性和重复性等。
4.临床应用研究：收集45例初诊PCa、29例治疗后前列腺癌、15例前列腺癌复发、54例良性前列腺增生(BPH)以及13例健康对照的PBMCs，对这些病例PBMCs的Foxp3mRNA含量进行的检测，并分析Foxp3mRNA的表达量在前列腺癌发生发展中的意义。
结果：
1.成功建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测Foxp3mRNA的方法，本方法检测灵敏度为25拷贝/反应，线性范围为25～2.5x109拷贝/反应，Ct值与拷贝数之间具有良好的线性关系，相关系数为0.995。批内、批间变异系数分别为3.02～4.13％和4.52～5.37％，重复性较好。扩增产物经测序分析，结果进行BLAST同源比较，扩增片段与NM_014009序列符合率为100％。
2.PCa组Foxp3mRNA表达量的中位数(Foxp3mRNA/GAPDHmRNA×10000)为8.80(3.31～10.76)和PCaR组[20.39(4.79～26.60)]，都明显高于BPH组[2.93(1.32～4.17)]、PCaT组[2.36(0.48～3.38)]及健康对照组[2.33(0.76～3.31)]，差异具有统计学意义(P＜0.01)；PCa组与PCaR组的Foxp3mRNA表达量差异无统计学意义(P＞0.05)；BPH组、PCaT组的Foxp3mRNA表达量较健康对照组的不升高，三组之间的表达量差异亦不具有统计学意义(P＞0.05)。
3.PCa组按病理Gleason评分分成高、中、低三组，三组间方差不齐(P＜0.05)，故采用秩和检验比较差别。三组间Foxp3mRNA表达量无显著性差异(P＞0.05)。再对评分与Foxp3mRNA表达量进行Spearman’s相关分析，相关系数-0.235，P＞0.05，Foxp3mRNA表达量与Gleason评分高低无明显关系。但从数值上看随着Gleason评分的增加Foxp3mRNA表达水平有下降趋势。PCa不同临床分期间Foxp3mRNA表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。将PCa组以是否发生骨转移分成两组，比较两组间差异，两组间无显著性差异(P＞0.05)。
结论：
1.荧光实时定量逆转录聚合酶链反应检测Foxp3mRNA的方法具有灵敏、特异、准确、重复性好等特点。
2.Foxp3mRNA在PCa组和复发前列腺癌组(PCaR)的PBMCs中高表达，为研究Foxp3mRNA在PCa的发生发展中肿瘤免疫方面所起的作用提供部分实验基础。
3.Foxp3是CD4+CD25+Treg细胞的特异标志物，Foxp3mRNA表达量的变化，与CD4+CD25+Treg细胞的数量变化一致。PCa如何引起PBMCs的Foxp3mRNA表达量升高还有待进一步研究。