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碱性氨基酸转运载体CAT(Cation amino acid transporter)家族是大部分非上皮细胞膜上介导碱性氨基酸跨膜转运的关键蛋白,现已确定其成员包括CAT1,CAT2,CAT3及CAT4。为研究猪碱性氨基酸转运载体CAT3的cDNA结构特征,探讨该基因mRNA的表达特点,本试验运用cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术克隆得到猪CAT3全序列(GenBank: EU780707),并对该序列进行生物信息学分析,同时采用荧光定量PCR方法检测猪CAT3 mRNA的组织特异性分布,并选用1、7、26和30日龄蓝塘和长白两品种猪十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品,采用荧光定量PCR方法检测猪CAT3 mRNA发育性表达。
研究结果如下:
1.利用RACE方法克隆得到一段2276bp的猪CAT3基因cDNA全序列,GenBank收录号为EU780707,其中包括5’非翻译区(Untranslated Region,UTR)127bp,3’非翻译区289bp,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)1860bp。
2.应用生物信息软件分析,结果表明,猪CAT3基因编码的蛋白序列为619个氨基酸,该基因与牛、人、小鼠和大鼠在核酸序列上分别有的94.4%、90.2%、84.3%、83.3%的同源性;在氨基酸序列上分别有94.5%、92.4%、89.7%、89.8%同源性。推测CAT3有14个跨膜螺旋结构,预测该蛋白包含一个AA-Permease superfamily保守结构域。
3.采用实时荧光定量RT-PCR检测1日龄长白猪CAT3 mRNA在各组织器官中广泛表达,在脑部和心脏表达量较高,在肝脏、肾脏、肌肉(背最长肌)、肠道(混合肠道)和肺部也有一定量的表达
4.采用实时荧光定量RT-PCR检测CAT3在1、7、26和30日龄蓝塘和长白两品种猪十二指肠、空肠和回肠组织样品的发育性表达,结果表明:蓝塘猪十二指肠在1d时显著高于其他各阶段(P<0.05);长白猪空肠在30d时显著高于其他各阶段(P<0.05);蓝塘猪回肠在30d时显著高于其他各阶段(P<0.05);长白猪结肠在1d时显著高于7d(P<0.05),其他阶段差异不显著(P>0.05);两品种猪不同日龄时在十二指肠和空肠CAT3 mRNA的表达量没有显著差异(P>0.05)。在30d时,蓝塘猪回肠的表达显著高于长白(P<0.05)。在1d时,长白猪结肠显著高于蓝塘猪的表达(P<0.05)。