钠离子通道β<,1>亚基条件性过表达小鼠的制备

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目的:为研究电压门控性钠离子通道β1亚基在神经病理性疼痛中的作用,制备β1亚基基因(SCN1b)条件性过表达转基因小鼠。 方法:将电压门控性钠离子通道β1亚基的编码序列片段经PCR扩增后,插入经EcoRⅠ,BamHⅠ 酶切后的表达载体pCMV-loxp- lacZ-loxp-IRES-eGFP中,得到新的表达载体pCMV-loxp-lacZ-loxp- SCN1b-IRES-eGFP,NsiⅠ酶切线性化后,应用显微注射法将构建好的目的片段注入小鼠的受精卵核中,移植受精卵入假孕母鼠输卵管,假孕母鼠后代小鼠经PCR检测阳性的小鼠,即为原代小鼠,通过原代小鼠的后代小鼠X-gal染色鉴定目的基因在原代小鼠的整合部位。 结果:假孕母鼠后代13只仔鼠,PCR检测出3只阳性,得到原代小鼠,通过原代小鼠的后代小鼠X-gal染色确定只有一只原代小鼠背根神经节(DRG)细胞染色阳性。 结论:成功制备在DRG条件性过表达SCN1b的转基因小鼠模型,为深入研究电压门控性钠离子通道β1亚基在痛觉调控中的功能提供了工具鼠。
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