【摘 要】
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犬细小病毒（Canine Parvovirus,CPV）是引起犬只急性出血性肠炎和心肌炎的病原,具有高致病性、高死亡率,给我国养犬业带来严重损失。自1977年出现以来,CPV-2就进行了遗传突变,连
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犬细小病毒（Canine Parvovirus,CPV）是引起犬只急性出血性肠炎和心肌炎的病原,具有高致病性、高死亡率,给我国养犬业带来严重损失。自1977年出现以来,CPV-2就进行了遗传突变,连续的出现两种抗原突变体CPV-2a和CPV-2b,逐渐取代了CPV-2。2000年CPV-2c的发现,引起犬只的致病性增加,宿主范围扩大,对野生动物的生存也产生了威胁。疫苗接种是控制犬类细小病毒最理想的办法,但母源抗体等因素的影响会导致免疫失败。因此,犬只一旦发病,常施以支持疗法、对症治疗,同时配合高免血清。本试验将实验室在广东地区分离鉴定保存的CPV-S5（New CPV-2a）和CPV-1401（New CPV-2b）毒株以最佳生长条件分别在F81细胞上扩大培养,通过小型切向流超滤浓缩,获得HA效价均达214的病毒液,再将β-丙内脂:病毒液按照1:2000的比例混合,4℃灭活24h后,37℃水浴2h。水溶性佐剂MONTANIDE GEL:灭活浓缩病毒液按照1:9比例混合制备灭活疫苗。疫苗检验合格后用于动物免疫。将两种疫苗按照1mL/只皮下注射CPV阴性犬只,28d后加强免疫。二免后7d HI抗体达到最高值。二免10d,颈动脉无菌取血,混合后获得HI效价为1:3072的高免血清。采用20%-50%饱和硫酸铵分步盐析对高免血清进行粗提纯除去大部分杂蛋白,对第三步盐析沉淀的硫酸铵浓度、pH进行优化,确定饱和硫酸铵浓度33%、pH 7.5为最优条件。按此方法大量提取纯化后,经HiTrap?Desalting 5mL预装柱脱盐,再通过小型切向流超滤浓缩系统制得犬细小病毒精制抗体,HI效价高达1:10240。无菌及理化性质鉴定达到标准,适合工业化生产。该制剂接种犬只后,均无不良反应,表明安全性好。
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