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研究背景
白血病是小儿时期最常见的恶性肿瘤，15岁以下儿童白血病的发病率为4/10万左右，约占该时期所有恶性肿瘤的35％。近20年来由于化疗的不断改进，急性淋巴细胞白血病(ALL)已不再被认为是致死性疾病，5年无病生存率达70％～80％：急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的初治完全缓解率亦可达90％以上，5年无病生存率在50％以上。由于细胞增殖动力学、分子生物学的不断发展，抗癌新药的不断发现与应用，化疗实施方案以及联合化疗方案的不断改进，使得恶性肿瘤的临床近、远期疗效不断提高，患者的生活质量进一步改善，生存期得以延长。虽然化疗治疗小儿白血病已取得较为满意的疗效，但仍远未达到理想的水平。因此，广大研究者仍努力地寻求疗效更好、副作用更少、更经济的药物和化疗方案。
槲皮素(Quercetin：3，3’，4’，5’，5，7-Pentahydroxyflavone，QUE)是一种黄酮类化合物，广泛分布于自然界各种植物的花、叶、果实之中，具有多种生物活性，如抗肿瘤，抗氧化清除自由基等。QUE能抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖，其中包括HL-60、NB4、MOLT-4、L1210等白血病细胞系。QUE能诱导肿瘤细胞发生凋亡，还能逆转肿瘤细胞的多药耐药，与其他药物联合应用增强抗肿瘤作用。近年来，对QUE在抗氧化清除自由基、保护心肌等方面的研究成果，引起了国内外学者越来越多的关注，也启发了研究的思路。
柔红霉素(Daunorubicin，DNR)是经济、高效的第一代蒽环类抗生素，是小儿AL化疗方案中的基本药物，也是提高ALL完全缓解率和长期生存率的一个重要药物，大多数ALL和ANLL化疗的诱导缓解、早期强化和强化治疗方案均为包含DNR的联合化疗。但应用DNR的累积剂量达到一定水平后，可引起心肌损伤、心律失常等心脏毒性作用，从而限制了它的临床应用。DNR诱发心脏毒性的确切发病机制目前仍不清楚，普遍认为是DNR产生的氧自由基损伤心肌。
基于QUE既有抗肿瘤的作用，又有抗氧化保护心肌的作用特点，研究中设想QUE与DNR联用是否既能协同或增强DNR抗白血病的正作用，又能减轻或预防DNR引起的心脏毒性。
研究目的
1.探讨黄酮类化合物槲皮素(QUE)单用及与柔红霉素(DNR)联用对人类单核细胞白血病细胞系U937、人慢性髓原白血病细胞系K562、人急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat的抑制增殖和诱导凋亡的作用。
2.探讨槲皮素对柔红霉素所致小鼠心脏毒性的预防保护作用及其机制。
研究方法
1.应用MTT法检测QUE单用及与DNR联用对U937、K562、Jurkat细胞的增殖抑制作用；计算联合用药指数(CDI)：AO/PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。
2.74只小鼠分7个实验组，2组作为空白对照组。3组用柔红霉素15mg/kgipl次，诱导小鼠心肌损伤，其中2组按不同剂量槲皮素ig给药作为干预组，1组作为柔红霉素阳性对照组。2组只给不同剂量槲皮素作为槲皮素阳性对照组。观察各组小鼠的血清心肌酶谱、心肌和血清中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。观察心脏大体改变，并制备病理切片，HE染色后，光镜下观察心肌形态学变化。
研究结果
1.QUE能抑制U937、K562、Jurkat细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系，两药联用对细胞增殖有较强的协同作用：QUE单用及两药联用均能诱导U937、K562、Jurkat细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着药物浓度升高凋亡细胞比例增加；在一定浓度范围内QUE将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰；两药联用组较单用DNR组，S期细胞的比例明显减少。
2.DNR能引起小鼠血清心肌酶谱显著升高，血清和心肌中MDA含量显著增高，SOD活性降低，引起心脏充血、水肿，心肌颗粒变性，灶性出血、坏死。而高剂量QUE干预组心肌酶升高程度明显降低、血清和心肌组织中MDA含量无明显增加，SOD活性不降低，心肌无明显出血灶及颗粒变性。低剂量QUE干预组的上述指标有部分改善。
结论
1.槲皮素能抑制U937、K562、Jurkat细胞的增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系，能诱导细胞凋亡，在一定浓度范围内将细胞增殖特异性地阻滞在S期，具有细胞周期特异性。
2.槲皮素与柔红霉素联用能协同抑制U937、K562、Jurkat细胞的增殖，促进细胞凋亡。与单用柔红霉素比较，两药联用可使S期细胞的比例明显减少，两药联用有协同作用。
3.通过小鼠动物实验证实，槲皮素对柔红霉素所致的心肌损伤有预防保护作用，存在剂量-效应关系，其机理可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关。槲皮素与柔红霉素联用可以预防柔红霉素可能出现的心脏毒性。
4.槲皮素可能成为一种既能与柔红霉素联用对白血病细胞产生协同抑制作用，又能预防柔红霉素心脏毒性的抗肿瘤药物。