B7-H4在间充质干细胞C3H10 T1/2移植治疗EAE中的作用及机制的初步研究

• 作 者: 张莹
• 机 构: 苏州大学
• 出 处: 苏州大学
• 发表日期: 2014年期
• 关键词: B7-H4 间充质干细胞 免疫调节 EAE C3H10

目的：通过体外实验，进一步明确B7-H4分子在小鼠间充质干细胞C3H10T1/2（以下简称C3H10）增殖、生存及迁移等生物学行为中的作用；通过体内实验，探讨B7-H4分子在C3H10细胞移植治疗小鼠EAE模型的体内效应。方法：1、构建B7-H4靶向shRNA转染的C3H10细胞（C3H10-shRNA），应用免疫荧光标记、流式细胞术检测B7-H4表达下调后，C3H10细胞的增殖能力、凋亡情况；检测C3H10细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,间接观察C3H10细胞迁移能力的改变；将C3H10、C3H10-shRNA等与小鼠脾脏淋巴细胞共同培养，用FCM检测其对淋巴细胞增殖作用。2、利用MOG35-55肽与完全弗氏佐剂混合,制作乳化剂进行腋下皮下单点注射，百日咳杆菌疫苗毒素尾静脉注射建立小鼠EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）模型，分以下几组进行移植研究:（1）尾静脉注射PBS的假手术组；（2）输注PBS的造模EAE小鼠；（3）C3H10细胞移植组；（4）C3H10-NC细胞（转染了未含靶向分子对照shRNA的C3H10)移植组；（5）C3H10-shRNA细胞（转染了B7-H4靶向shRNA的C3H10)移植组。其中C3H10细胞移植组、C3H10-NC细胞移植组、C3H10-shRNA细胞移植组在免疫后第6天分别经尾静脉在EAE模型小鼠体内输注1×106/只各组细胞，每日对各组小鼠进行神经功能缺损评分、体重测量，组织病理检测炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴突损害以及组织化学染色检测B7-H4表达，评定不同干预手段对EAE病理过程的影响，明确B7-H4分子在C3H10移植治疗EAE中的作用。结果：1、下调C3H10上B7-H4，可部分逆转C3H10对脾脏淋巴细胞增殖的抑制作用；并使C3H10细胞本身增殖减慢、凋亡增多；细胞表面趋化因子受体CXCR4表达下调。2、体内实验结果显示：（1）神经功能缺损评分：尾静脉输注PBS的假手术组（正常对照组）小鼠无发病，输注PBS的EAE造模组小鼠发病时间早且症状重，神经功能缺损评分高；经C3H10细胞及C3H10-NC细胞移植组小鼠发病时间晚且症状严重程度较轻，神经功能缺损评分维持在较低水平；C3H10-shRNA细胞移植组小鼠发病程度较C3H10细胞移植组重，但较EAE造模组小鼠严重程度较低。本次实验小鼠发病率达90%，死亡1只，死亡率2.5%。（2）体重测量：正常对照组小鼠体重呈持续增长趋势；EAE造模组小鼠体重在发病后一段时间呈下降趋势，后有缓慢增长，而C3H10-shRNA细胞移植组小鼠体重变化基本与EAE造模组一致；C3H10细胞及C3H10-NC细胞移植治疗组体重在观察期间有波动，整体呈上升趋势，但体重增加幅度与正常对照组相比较缓。（3）脊髓病理检测显示，假手术组小鼠未见明显异常，EAE造模组、C3H10细胞移植组、C3H10-NC细胞移植组、C3H10-shRNA细胞移植组均出现炎性细胞浸润、髓鞘脱失及轴索损害表现，但C3H10移植组小鼠炎性细胞浸润、髓鞘脱失及轴索损害程度明显较C3H10-shRNA细胞移植组减轻。（4）免疫组织化学染色结果示,C3H10细胞移植组与C3H10-NC细胞移植组，B7-H4阳性细胞数明显较EAE造模组、C3H10-shRNA细胞移植组多。结论：C3H10细胞移植治疗EAE的病理过程安全、有效，B7-H4分子可能通过影响C3H10的免疫调节作用、细胞存活、增殖、迁移等生物学行为，而影响移植疗效。表明B7-H4分子在C3H10移植治疗小鼠EAE模型的病程中发挥了一定作用。