【摘 要】
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全文分为三部分: 1.为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(CTB)，用PCR的方法从霍乱弧菌基因组DNA中扩增不含前导肽的ctb基因片段，将其转入Novagen公司的原核载体质粒pET-30a
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全文分为三部分:
1.为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(CTB)，用PCR的方法从霍乱弧菌基因组DNA中扩增不含前导肽的ctb基因片段，将其转入Novagen公司的原核载体质粒pET-30a(+)，得到重组质粒pET-CTBE。重组质粒中ctb基因的全长序列经分析与Genbank公布的一致。再将pET-CTBE转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。表达蛋白形成包涵体，经过变性复性，得到可溶性蛋白。SDS-PAGE分析，相对分子量与文献相符，蛋白主要以五聚体形式存在；重组蛋白经Western印迹检测有抗原性；经GM1-ELISA检测，重组蛋白可以与GM1神经节苷脂结合，有CTB样生物学活性。
2.按大肠杆菌偏好的密码子序列，人工合成了人龋齿主要致病菌变形链球菌的葡糖基转移酶(GTF)的催化表位(CAT)与葡聚糖结合表位(GLU)及表面抗原Ⅰ/Ⅱ(AgⅠ/Ⅱ)的唾液结合表位(SBR)的编码基因，再将它们合读框地同霍乱毒素B亚单位基因及硫氧还蛋白基因融合，得到了四个融合基因ctb92、ctb923、Trx92和Trx923。将它们分别在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，并对重组蛋白进行了分析。
3.为了探索利用马铃薯生产人龋齿口服疫苗的可能性，构建了含有土豆块茎特异性启动子Patatin、龋齿疫苗与霍乱毒素B亚单位融合基因ctb92、马铃薯蛋白酶抑制剂基因Ⅱ(Pin2)的3’末端非翻译区(UTR)序列和NOS终止子的植物转化载体p3b92。通过三亲杂交法将这个转化载体转入根癌农杆菌LBA4404，转化马铃薯。得到抗性苗64株，其中28株经PCR检测为阳性。
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