苏丹草再生体系的优化和遗传转化体系的初步建立

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guofeng1988
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苏丹草(Sorghum Sudanense)为高梁属牧草,属于C4植物,具有产量高,耐刈割,再生性能强,营养价值丰富,适口性好以及耐贫瘠、抗逆能力强、适应范围广等优点,在中国南方为主要的牧草,主要用作家畜的饲草。本试验探讨了影响苏丹草愈伤组织诱导、分化、生根的因素,并对农杆菌侵染愈伤组织的条件进行了初步的摸索。实验一中以苏丹草幼穗为外植体,以MS培养基为基本培养基,通过正交设计探讨了激素的种类和浓度、活性炭(AC)、水解酪蛋白(CH)、脯氨酸(Pro)对愈伤诱导率的影响;通过调整分化培养基激素的种类和浓度以及添加分化促进剂(AgNO3和CuSO4),探讨其对愈伤分化的影响;通过调整培养基成分和激素种类探讨了影响再生苗生根的因素。结果表明:通过正交设计得出,影响愈伤诱导的主次因素依次是:2,4-D>KT>CH>Pro>AC,当2,4-D的浓度为4mg/L,KT浓度是0.1mg/L,Pro浓度为2000mg/L,AC浓度为50mg/L,CH浓度为1000mg/L,愈伤诱导率及愈伤形态最优;当分化的激素为0.1mg/L NAA和2mg/L6-BA时,最高分化率可达50%,且在分化培养基中添加分化促进剂CuSO40.5mg/L时,分化率可达69.57%,添加AgN035mg/L时,分化率可达41.12%,添加CuSO4的效果优于AgNO3;当生根培养基为1/2MS+0.1NAA时,其生根率可达97%。实验二中以不同类型的愈伤组织为试验材料,通过石蜡切片、DNA含量及分化率的比较,探讨了适合用于农杆菌侵染的愈伤类型,然后再通过单因素处理,摸索了农杆菌种类、OD值、AS浓度、AC添加浓度及共培养时间对侵染效果的影响,通过GUS基因瞬时染色评定。结果表明,通过观察比较了不同愈伤组织的石蜡切片、DNA含量及分化率,得出白色、质密、易碎的Ⅲ型愈伤最适合农杆菌侵染。经过单因素处理,农杆菌侵染条件为,农杆菌菌种为LBA4404,OD值为1.2,AS浓度为20mg/L, AC添加浓度为50mg/L,共培养时间为3d。
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