【摘 要】
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肉鸡是一类被广泛用于商品化生产鸡肉的鸡的总称，它也被认为是一种研究肌肉生长的理想模式动物。与蛋鸡相比，肉鸡拥有更多更粗的肌纤维，其成肌细胞表现出更强的增殖能力和迟缓的
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肉鸡是一类被广泛用于商品化生产鸡肉的鸡的总称，它也被认为是一种研究肌肉生长的理想模式动物。与蛋鸡相比，肉鸡拥有更多更粗的肌纤维，其成肌细胞表现出更强的增殖能力和迟缓的分化能力，而导致这种特殊发育的原因尚不清楚。为了解决这一问题，我们研究了microRNA可能参与的肌肉表型分子机制。 通过基因芯片和定量PCR技术，我们发现肉鸡肌肉中miR-199-5p含量较为丰富，并且无论是对于肉鸡还是蛋鸡的成肌细胞，提高该miRNA都能引起其分化能力的降低以及在细胞周期中维持更长时间，与之相反，miR-199-5p水平的降低促进了成肌细胞的分化和从细胞周期中退出。因为miRNA识别的靶基因位点一般是保守的，所以我们也在另一种广泛运用的鼠成肌细胞C2C12中检测了该miRNA的功能。与在原代鸡成肌细胞中得到的结果一致，表明miR-199-5或许可以决定肌肉的发育过程。 运用生物信息学分析筛选，我们发现non-muscle myosinⅡA可能是miR-199-5p的靶基因。通过荧光素酶分析实验，确定miR-199-5p能够直接与基因Myh9的mRNA结合。Myh9可以编码肌球蛋白重链9，而后者为非肌肉特异性肌球蛋白ⅡA(NMⅡA)的必需组成元件。免疫印迹结果显示，成肌细胞分化过程中，miR-199-5p的含量与NMⅡA的蛋白丰度成反比，并且这种改变是不依赖于Myh9mRNA水平高低的。同时，在C2C12中下调Myh9也能引起分化成肌管能力的降低。我们进一步检测了鸡胚中miR-199-5p的丰度，发现在高表达该miRNA的肉鸡肌肉中，NMⅡA蛋白呈现出较低的含量。因此，我们认为肌肉发育过程中，NMⅡA为miR-199-5p的靶基因。 为了验证mir-199-5p/NMⅡA这一分子机制是否在鸡体内存在，我们也通过向鸡胚注入寡核苷酸链的形式改变其中miR-199-5p的含量。一个有趣的现象是，无论蛋鸡肉鸡，下调胚胎期的miR-199-5p都引起出生后体重下降趋势。最终，我们随机选择了几种肉鸡和蛋鸡，检测其肌肉发育过程中miR-199-5p和NMⅡA蛋白水平的表达谱，结果表明，肉鸡均高表达miR-199-5p，同时NMⅡA蛋白丰度较低，这进一步证明了我们的猜想。 基于以上的结果，我们认为肉鸡成肌细胞中高表达的miR-199-5p能够通过抑制NMⅡA蛋白翻译延迟肌肉分化，继而促进增殖形成较多成肌细胞，进一步分化成更多肌纤维。
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