骨髓间充质干细胞早期移植干预角膜碱烧伤的实验研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cai2001m
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目的:研究早期结膜下或角膜基质内移植小鼠骨髓间充质干细胞(b o ne marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)干预角膜碱烧伤的可行性,并探讨其可能的作用机制。  方法:(1)培养绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞(mMSCs-GFP),证明其活性,可扩增传代,并对其表面标志和多向分化潜能进行鉴定。(2)选择与mMSCs-GFP同源的EGFP-C57BL/6阴性小鼠建立角膜碱烧伤模型。将mMS C s-GFP移植到碱烧伤模型左眼的结膜下和角膜基质内,同时右眼作为对照组(移植 P BS或不干预)。分别于移植后3天、7天、14天和28天观察角膜透明度、角膜新生血管和角膜上皮愈合情况,明确mMS C s-GFP在角膜内的存活、迁移和分化情况。应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测炎症相关因子白介素6(Interleukin6,IL-6)和白介素10(Interleukin10,IL-10)的变化情况,应用实时荧光定量 PCR(Realtime-PCR)法检测小鼠角膜血管生成相关因子血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF) mRNA表达水平变化情况。  结果:(1)体外培养的mMS Cs-GFP生长旺盛,增殖速度快,表达Sc a-1、C D29和 C D73,而不表达造血干细胞表面标志 C D34、C D45。mMSCs-GFP具有向脂肪、成骨和成软骨细胞的分化潜能。(2)结膜下移植 mMS Cs-GFP可改善小鼠角膜碱烧伤模型眼的角膜混浊程度,抑制新生血管的生成并且加速角膜上皮的修复,增加了可溶性抗炎症因子IL-6、IL-10的分泌,下调血管新生因子VEGF,上调抗血管新生因子 PEDF的表达水平,与对照组比较都存在显著差异(P<0.05)。mMS C s-GFP没有迁移至角膜组织内,也没有分化为角膜上皮样细胞。(3)角膜基质内移植mMSCs-GFP没有改善角膜碱烧伤模型眼的角膜混浊程度、角膜新生血管和角膜上皮的修复速度,也没有影响角膜组织内IL-6、IL-10、VEGF和PEDF的表达水平,其原因可能是因为移植的mMSCs-GFP没有在同种异体的角膜组织内存活并发挥功能。  结论:我们的实验研究了mMSCs-GFP早期移植干预角膜碱烧伤的可行性,发现结膜下移植 mMSCs-GFP通过其旁分泌作用,调节局部免疫反应,改变眼表微环境,抑制了炎症反应和新生血管的生成,从而改善了角膜碱烧伤的愈后。然而,角膜基质内移植 mMS Cs-GFP治疗效果并不显著,其原因可能是局部微环境严重紊乱时,不利于mMSCs-GFP的存活,难以发挥其正常的功能。
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