【摘 要】
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随着水稻基因组计划的日渐完成,下一步的重要工作就是研究各个基因的功能以及基因间的相互作用,突变体则是研究基因功能的重要材料.由于RNA干涉的高效性、特异性和系统性,RNA
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随着水稻基因组计划的日渐完成,下一步的重要工作就是研究各个基因的功能以及基因间的相互作用,突变体则是研究基因功能的重要材料.由于RNA干涉的高效性、特异性和系统性,RNA干涉技术已成为基因功能研究中的有效工具.该论文围绕植物基因RNA干涉技术和利用RNA干涉技术研究水稻基因功能开展了以下的研究工作.第一部分是探索RNA干涉技术对调控水稻基因表达的效果,并以此研究多个水稻WD基因和其它基因的生物学功能.第二部分的研究内容是,为了建立高效的RNA干涉载体自动生成系统以适应高效的植物基因功能研究的需要,首先创建基于Cre/loxP系统的多组不可逆特异重组位点.该研究设计一种高效的不可逆特异重组筛选策略,通过简并碱基的方式改变loxP位点中的13-bp反向重复序列和8-bp间隔区,经过Cre重组酶介导的重组并施以强制性单向重组筛选,鉴定了129个发生了不可逆重组反应的单克隆.测序结果显示,共发现了40种不同间隔区的129组不可逆重组loxP突变位点.这些不可逆loxP位点的发现为开发高效的RNA干涉载体自动生成系统和其它载体系统如多基因自动组装载体系统创造了条件.
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