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目的研究中药玉竹提取物B(ExtractionBofpoly-gonatomodoratum,EB-PAOA)对CEM和正常人类T淋巴细胞增殖的作用,并有限地探讨了EB-PAOA对CEM的作用机制。
方法应用两极性溶剂二甲基亚砜溶解EB-PAOA,分别稀释为1:4000、1:2000、1:1000和1:500(v/v)不同浓度,设DMSO与1640对照组,再分别与CEM和正常人类T淋巴细胞培养。采用MTT法测EB-PAOA对CEM和人类正常T淋巴细胞增殖的作用;流式细胞仪检测EB-PAOA对CEM凋亡率的影响;琼脂糖电泳检测EB-PAOA对CEM细胞的DNA变化的影响;电镜观察EB-PAOA对CEM的形态学改变的影响。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CEM产生sIL-2R及EB-PAOA对sIL-2R产生的影响。
结果EB-PAOA能抑制CEM的增殖,从1:4000(v/v)开始抑制作用逐渐增强,1:500(v/v)抑制作用最大(P<0.05),并且随着时间的延长其抑制作用也逐渐增强,呈明显的时间-剂量依赖关系。流式细胞仪检测结果表明,随着时间的延长,在同一浓度下凋亡的细胞逐渐增多;在同一时间里,随浓度的增加细胞凋亡的数量也逐渐增多,最大凋亡率为25.06%。琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带,随剂量增加,梯状带也随之增强。在电镜下见到大量坏死的细胞和典型的凋亡细胞。
体外培养的CEM细胞可以产生sIL-2R,1天为33.1±2.46pg/ml;3天为42.57±3.88pg/ml;5天为40.67±10.97pg/ml,EB-PAOA对sIL-2R的产生没有影响。EB-PAOA对人正常T淋巴细胞的增殖没有抑制作用(P>0.05)。
结论EB-PAOA能抑制CEM细胞的增殖,其机制之一是EB-PAOA可以诱导CEM细胞发生坏死和凋亡,且呈明显的时间-剂量依赖性;CEM细胞可以产生sIL-2R,但EB-PAOA对CEM产生sIL-2R未见到影响。EB-PAOA对正常人类T淋巴细胞的增殖未产生影响。