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研究背景口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)是一种常见的由T细胞介导的免疫性疾病,其中CD4+T细胞通过释放一系列细胞因子以及激活CD8+毒性T细胞参与OLP的免疫发病机制。包括我们在内的许多学者都认为,OLP外周血中CD4+T细胞的激活、分化和分泌功能与正常存在较大差异。微小RNA (microRNA, miRNA)是一类小分子单核苷酸链,约含有20-25个碱基,通过与靶基因结合,调控真核生物近1/3基因的转录后翻译过程,研究显示异常表达的miRNA通过调控免疫细胞及免疫靶向细胞中的基因表达,在自身免疫病的发生、发展过程中发挥重要作用。外周血中异常表达的miRNA,由于易于检测且稳定性高,已被当作许多自身免疫病病情严重程度、诊断、预后评价的潜在生物学标记物。目的1.寻找OLP外周血中异常表达的miRNA,分析它们与OLP病情严重程度及血清中炎性因子的关系。2.在OLP CD4+T细胞中验证miR-155与其靶标细胞因子信号传导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling1, SOCS1) mRNA的关系。3.分析OLP CD4+T细胞中miR-155功能调控对炎性环境的影响。4.探讨OLP CD4+T细胞中miR-155功能调控对CD4+T细胞及角质形成细胞的影响。材料与方法1.严格遵守OLP患者纳入与排除标准,筛选合适的OLP患者和健康志愿者。2.使用RAE (reticular, atrophy, erosive)计分系统对OLP患者的病情严重程度进行评估。3.使用SYBY Green法定量聚合酶链技术检测OLP外周血中miR-155、 miR-146a、miR-125a-5p、miR-203和CD4+T细胞中的SOCS1mRNA的含量。4.使用酶联免疫吸附法检测OLP血清中细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ)和趋化因子(CCL5、CCL26)的表达水平。5.使用磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分离CD4+T细胞。6.使用TargetScan (version5.2; http://www.targetscan.org)和PicTar (http://pictar.mdc-berlin.de/),分析miR-155与SOCS1mRNA的靶位关系。7.以Lipofectamin2000为载体,通过miR-DownTM antagomir-155和miR-UpTM agomir-155的修饰作用实现CD4+T细胞中miR-155的功能性调控。8.使用CCK8检测CD4+T细胞和角质形成细胞增殖活性。结果1.与对照组相比,OLP患者外周血中miR-125a的表达下降,而糜烂型口腔扁平苔藓(erosive oral lichen planus, EOLP)患者外周血中miR-155表达上升,并且它们的表达与RAE计分显著相关。2.在OLP患者血清中,Thl型细胞因子IL-2和IFN-γ和趋化因子CCL5表达水平上升,而Th2型细胞因子IL-4和IL-10表达水平下降。3.不同类型OLP患者组及健康组中,外周血高表达的miR-155与血清中的IFN-γ表达模式一致,而与血清中IL-4表达模式相反。4.miR-155高表达的EOLP患者CD4+T细胞中,SOCS1mRNA的含量下降,并且与miR-155的表达水平呈负相关。5.体外实验中,EOLP CD4+T细胞中miR-155功能上调,可以引起上清中IL-4和IFN-y含量下降；其功能下调则会使IL-4含量增加而IFN-y含量下降。6. IFN-y可诱导EOLP患者CD4+T细胞中miR-155表达上升。7. EOLP患者CD4+T细胞中,miR-155的调控功能会改变CD4+T细胞的增殖活性,而共培养体系中角质形成细胞的细胞形态和增殖活性都会因此发生改变。结论1.OLP外周血中的miR-155和miR-125a可以作为潜在的生物学标志,评估OLP病情严重程度。2. miRNA-155在OLP外周血中的特异性上调,可能与血清中Thl型细胞因子的优势表达有关。3. EOLP CD4+T细胞中,miR-155可能通过靶位SOCS1与IFN-γ形成正反馈调控关系。4. EOLP CD4+T细胞中,miR-155的功能调控会影响CD4+T细胞增殖活性以及共培养体系中角质形成细胞的增殖活性及细胞形态。