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氧化反应是生物体在新陈代谢过程中常发生的活动,活性氧（ROS）和活性氮（RN）作为其主要产物,在生理功能中起着双重作用。化学修饰的抗氧化剂对人体构成潜在危害而存在使用限制,所以从动植物中获取具有较高安全性和较高活性的天然抗氧化物质,对机体提高自身抗氧化能力具有重要意义。河蚬是一种双壳贝类,广泛分布于我国内陆水域,具有很高的营养价值。本文通过分离纯化技术提取河蚬中抗氧化肽,并进一步研究其对化学急性肝损伤的保护作用。研究结果如下:首先以河蚬软体为原料,对其营养成分及营养品质进行了比较和分析。结果表明:河蚬软体部分水分含量为86.64%,干样品中粗蛋白、粗脂肪以及灰分含量分别为62.80%、11.67%和4.82%。样品中有17种氨基酸（557.87 mg/g）,氨基酸种类齐全,其中6种必需氨基酸（206.77 mg/g）,占氨基酸总量的37.06%,且必需氨基酸与氨基酸总量构成比例达到国际标准要求。河蚬软体中还含有较丰富的矿物质,尤其是Cu和Zn元素均高于常见贝类。综上所述河蚬是一种具有较高营养价值的软体动物。通过对多肽获得率、水解度和DPPH自由基清除能力的测定,确定胰蛋白酶为河蚬的最佳水解酶。以DPPH自由基清除能力作为评价指标,进行水解单因素实验并通过响应面优化工艺参数。最终得到最优酶解条件为:酶解温度45℃、pH值7.5、料液比（w/v）1:7.5和酶加量2020 U/g。在此条件下得到的酶解液DPPH自由基的清除率达到62.22%。河蚬软体水解后,通过超滤系统将多肽分成>10 ku、10 ku-5 ku、<5 ku三个组分,结果表明<5 ku的多肽组分体外抗氧化活性最强。采用Sephadex G-25凝胶层析对分子量小于5 ku的河蚬多肽进一步分离,获得Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ四组分,通过细胞实验得出组分Ⅰ具有最强的保护HepG-2细胞免受H2O2氧化损伤能力,然后利用DEAE阴离子交换层析将组分Ⅰ分为九个组分,其中FⅠ-3具有最强的DPPH自由基清除能力,最终利用RP-HPLC纯化得到目标多肽X。通过质谱分析得其分子量为988.3 u,氨基酸序列为KGPAPFYPL。最后,利用CCl4构建小鼠化学急性肝损伤模型,研究小分子河蚬肽在增强小鼠抗氧化防御系统、抑制促炎症反应和肝细胞凋亡方面的作用。结果表明,小分子肽对小鼠无毒害作用,并且能够降低肝脏指数、提高脾脏指数,减少血清中ALT和AST含量,提高肝脏中SOD和CAT含量,减少MDA含量。通过HE染色、免疫组化实验和TUNEL染色观察,小分子多肽能够明显改善肝脏组织损伤,减少炎症因子的生成,同时抑制化学损伤导致的肝细胞凋亡。综上所述,小分子多肽具有保护肝脏的作用。