B群脑膜炎奈瑟菌重组NspA蛋白疫苗的免疫活性及其对小鼠的免疫保护作用

• 作 者: 应上云
• 机 构: 南华大学
• 出 处: 南华大学
• 发表日期: 2013年01期
• 关键词: B群脑膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A 重组蛋白 免疫活性 免疫保护

目的：探讨B群脑膜炎奈瑟菌NspA原核重组蛋白诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，初步评价rNspA对实验小鼠的免疫保护作用，为研制B群脑膜炎奈瑟菌蛋白疫苗提供相关实验依据。方法：以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板，构建原核重组表达载体pGEX-6P-1/NspA，大量表达重组蛋白，经GST亲和层析纯化柱pH梯度洗脱，收集重组蛋白，采用Western-blot法鉴定。腹腔途径免疫雌性BALB/c小鼠，采用间接ELISA法检测免疫小鼠生殖道黏膜分泌液中抗NspA的sIgA抗体水平和血清中抗NspA的IgG及其亚类抗体水平，ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ水平，CCK8法检测脾淋巴细胞增殖反应。按比例混合MC58菌液、免疫血清及乳兔补体，测定血清抗体体外杀菌滴度。构建小鼠感染动物模型，观察和计算rNspA对实验小鼠的免疫保护率。结果：构建的原核表达载体pGEX6p-1/NspA，经双酶切和测序鉴定正确。通过优化诱导表达条件，rNspA能在培养上清中以可溶性状态表达，表达产物采用GST树脂纯化后经Western-blot鉴定，证实该目的蛋白的存在。腹腔途径免疫雌性BALB/c小鼠，rNspA组小鼠生殖道黏膜产生的特异性sIgA和血清特异性IgG及IgG亚类抗体水平均呈上升趋势，rNspA组小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA及小鼠血清中总IgG、IgG1、IgG2a、IgG3在第6周时均达到最大值，抗体效价分别为1:2800、1:8800、1:7000、1:5120和1:2800；rNspA免疫组血清IgG2a/IgG1的比值，在免疫的2w、4w、6w、8w时分别为0.795、0.637、0.710和0.624，比值均小于1。INF-γ、IL-4的含量在第6周达到高峰，分别为300.0pg/mL、229.0pg/mL；rNspA组脾淋巴细胞刺激指数（SI）为1.61，明显高于GST和PBS对照组（P<0.05）。rNspA组小鼠免疫血清稀释度为1：64时，其体外杀菌率达50%以上；rNspA免疫组小鼠感染MC58后72h内，小鼠的存活率高达100%，而对照组（GST组、PBS组）小鼠感染MC58后72h后的存活率为0。结论：1.成功构建了B群脑膜炎奈瑟菌表面蛋白A原核表达重组载体pGEX6p-1/NspA。2. rNspA能诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答和细胞免疫应答水平，且以Th2倾向性体液免疫应答为主；可在黏膜局部诱生较高水平的特异性sIgA抗体。3. rNspA对感染B群脑膜炎奈瑟菌的实验小鼠具有较强的免疫保护作用，免疫血清体外在补体介导下具有一定杀菌活性。