一种携带荧光素酶的新型HSV-1 BAC系统的建立及UL16缺失病毒的构建

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:michaelgang1
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Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type1,HSV-1)是一种普遍存在的与人体皮肤和粘膜感染相关的病原,并能造成终生感染。作为典型的α疱疹病毒科的病毒,HSV-1含有较大的基因组DNA,编码84个开放读码框(ORF),但大部分ORF的功能还不清楚。   本研究在不破坏任何病毒基因的前提下,HSV-1 F株的全基因组被克隆为稳定的感染性细菌人工染色体(BAC)克隆。含有两loxP侧翼序列的BAC骨架被插入到HSV-1 UL37和UL38基因之间的间隔区。将该重组BAC与Cre质粒共转染可以获得BAC骨架切除的重组HSV-1病毒。同时,荧光素酶表达盒也被插入到HSV-1 BAC中,从而构建了一种新型的稳定表达荧光素酶的HSV-1 BAC(HSV-1BAC Luc)重组病毒。结果表明,HSV-1 BAC Luc病毒在Vero细胞中的生长特性和野生型HSV-1相似,并且荧光素酶的活性可以方便地在体外进行定量。此外,利用此新建立的HSV-1 BAC Luc系统,构建了UL16缺失的重组病毒,结果在缺失UL16时,病毒的滴度仅轻微地降低了,从而表明UL16基因对病毒的复制是非必需的。总之,新建立的HSV-1 BAC Luc系统可以方便地用于缺失病毒的构建及随后的基因功能分析。
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