【摘 要】
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该研究的目的在于利用消减杂交法(Substractive Hybridization)机制来建立一种从大容量的寡核苷酸(Oligo-dexoxyribonucletides.ODNs)库中筛选特定寡核苷酸片段的方法,同时利
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该研究的目的在于利用消减杂交法(Substractive Hybridization)机制来建立一种从大容量的寡核苷酸(Oligo-dexoxyribonucletides.ODNs)库中筛选特定寡核苷酸片段的方法,同时利用生物信息学方法,来预测相关生物学信息.该方法基本原理为:将寡核苷酸库与小鼠纤维肉瘤细胞(WEHI)的mRNA杂交,然后将与WEHI mRNA结合的寡核苷酸片断分离出来再与另外一种细胞小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的mRNA杂交,收集未与NIH3T3 mRNA结合的寡核苷酸片段,可得到能与WEHI mRNA杂交结合而不与NIH3T3 mRNA杂交结合的寡核苷酸片段,对这些寡核苷酸片段进行扩增纯化分离后,转染细胞,根据转染细胞的效果进一步进行克隆测序,据测序结果来推测WEHI mRNA上某些特定的碱基序列,这些序列可作为RNA干扰(RNA interference.RNAi)及反义寡核苷酸的可能作用位点,同时利用生物信息学方法预测这些序列所代表的基因信息及与这些序列结合的相应mRNA的二级结构,从而进一步为后续的SiRNAs技术及反义核酸技术更深入的研究打下基础.
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