【摘 要】
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SCF在造血干细胞及祖细胞增殖、分化、定居中发挥重要作用,随着对SCF基造血干细胞生理学功能的了解和深入,SCF基因的表达调控也越来越引起研究者的注意.在该室已完成部分cDNA
【出 处】
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湖南医科大学 中南大学湘雅医学院 中南大学
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SCF在造血干细胞及祖细胞增殖、分化、定居中发挥重要作用,随着对SCF基造血干细胞生理学功能的了解和深入,SCF基因的表达调控也越来越引起研究者的注意.在该室已完成部分cDNA的克隆及其在大肠杆菌表达的研究基础上,该文应用在常规PCR体系中,采用有3→5外切核酸酶活性的具有校正功能的DNA耐热聚合酶,分别以人基因组DNA和HepG2 mRNA为模板,行PCR和RT-PCR,扩增出1.42kb的SCF-5-旁侧调控序列和SCF 1.2kb的全长cDNA序列.将此两PCR产物分别克隆入pGEM-T载体中,通过消除一个酶切位点,分别用合适的限制性内切酶切出二个所需的片段,逐一先后亚克隆入pUC19克隆载体中,实现了SCF-5-旁侧调控序列与全长含启动子区的cDNA完整基因的结合.同时将SCF cDNA具有编码SCF主要活性的165个氨基酸的DNA片段克隆入pLNL-XHC逆转录病毒载体中,为进一步研究SCF-5近端启动子区及调控元件的结构及功能,为研究SCF基因的转录调控提供了必要的材料,并为SCF基因工程的研究及基因治疗奠定了一定的基础.
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