【摘 要】
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目的:筛选前列腺癌中异常表达的长链非编码RNA,明确MIR22HG对前列腺癌增殖、迁移、凋亡及EMT等生物学功能的影响。初步探索MIR22HG调控前列腺癌进展的相关分子机制,为前列腺癌的诊断和靶向治疗提供新思路。方法:1.利用Lnc RNAs芯片比较前列腺癌组织和癌旁组织中表达差异的Lnc RNAs;TCGA corhort、GSE6919 corhort两个数据集验证芯片检测结果;应用q RT-
【基金项目】
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江苏省自然科学基金（BK20191221）; 镇江市科技创新资金（SH2020025）
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目的:筛选前列腺癌中异常表达的长链非编码RNA,明确MIR22HG对前列腺癌增殖、迁移、凋亡及EMT等生物学功能的影响。初步探索MIR22HG调控前列腺癌进展的相关分子机制,为前列腺癌的诊断和靶向治疗提供新思路。方法:1.利用Lnc RNAs芯片比较前列腺癌组织和癌旁组织中表达差异的Lnc RNAs;TCGA corhort、GSE6919 corhort两个数据集验证芯片检测结果;应用q RT-PCR检测18例前列腺癌患者的癌组织和配对癌旁组织中MIR22HG的表达差异。2.在前列腺正常上皮细胞系（RWPE-1）和4种前列腺癌细胞系（PC3、DU145、LNCa P和22RV1）中使用q RT-PCR法检测其中MIR22HG的表达。将MIR22HG的si RNA或过表达质粒转染前列腺癌细胞后,应用q RT-PCR检测MIR22HG敲减和过表达效率。在前列腺癌细胞内沉默或过表达MIR22HG后,利用CCK-8技术检测前列腺癌细胞增殖、Transwell实验观察前列腺癌细胞迁移情况、贝克曼流式细胞仪检测前列腺癌细胞凋亡情况,western blot实验检测与EMT相关的信号通路的蛋白表达。裸鼠体内植瘤实验验证敲减或过表达MIR22HG对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。3.通过生物信息学预测能够和MIR22HG结合的miRNA。利用细胞转染技术分别过表达或敲减前列腺癌细胞中MIR22HG的表达,之后用q RT-PCR检测细胞内miRNA的变化。采用双荧光素酶报告实验检测MIR22HG与miR-4428的结合情况;使用q RT-PCR技术对18例前列腺癌患者的癌组织以及相应的癌旁组织中miR-4428的表达差异进行检测。进一步通过皮尔森相关分析检测miR-4428和MIR22HG在组织内表达相关性。接下来,在沉默或过表达miR-4428后,通过CCK-8、transwell、western blot、贝克曼流式细胞仪检测前列腺癌细胞中miR-4428对其功能的影响。最后,通过一系列功能回复实验证实,MIR22HG通过miR-4428抑制前列腺癌进展。结果:1.芯片最终结果提示前列腺癌组织中MIR22HG的表达显著低于前列腺癌旁组织。TCGA和GEO数据库验证结果显示,前列腺癌组织中的MIR22HG表达显著降低。q RT-PCR检测进一步证明:MIR22HG在18例前列腺癌组织中的表达明显低于相对的癌旁组织。2.应用q RT-PCR法最终结果提示,MIR22HG在前列腺癌细胞系中的表达要明显降于前列腺正常上皮细胞。在PC3细胞中敲减MIR22HG可以促进前列腺癌细胞的增殖、以及前列腺癌细胞的迁移能力,降低细胞凋亡率,促进EMT进程,而在前列腺癌细胞中过表达MIR22HG,则会取得与敲减MIR22HG相反的结果。在裸鼠植瘤实验中,过表达MIR22HG抑制了前列腺癌细胞在裸鼠体内的增殖,而MIR22HG被敲减后前列腺癌细胞的体内增殖得到了促进效果。3.通过实验发现,前列腺癌细胞和前列腺癌组织中miR-4428的表达水平明显高于前列腺正常上皮细胞和前列腺癌旁组织,且其表达量与MIR22HG呈负相关。通过双荧光素酶实验明确了MIR22HG和miR-4428存在相互结合;与对照组相比,miR-4428 mimics对前列腺癌细胞的增殖、迁移增强,细胞凋亡率降低,激活EMT进程,而敲减miR-4428可以取得相反的结果。回复实验证明,miR-4428能够逆转MIR22HG对前列腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡及EMT的作用,提示miR-4428可能介导了MIR22HG对前列腺癌的调控。结论:MIR22HG在前列腺癌细胞系和前列腺癌组织中均低表达,并且该Lnc RNA能够抑制前列腺癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,同时可以抑制EMT进程。MIR22HG通过靶向miR-4428的ce RNA机制调控前列腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡,并对EMT相关蛋白的表达产生影响。
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