【摘 要】
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目的：研究非瑟酮(fisetin, Fis)在生理状态下及氧化应激状态下对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells, HLECs)增殖和凋亡的影响。方法：(1)实验准备：将冻存的人晶状体
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目的：研究非瑟酮(fisetin, Fis)在生理状态下及氧化应激状态下对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells, HLECs)增殖和凋亡的影响。方法：(1)实验准备：将冻存的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)复苏后,置于含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基(葡萄糖终浓度5.56mmol/L)中培养,传代,收集对数生长期细胞进行以下实验。(2)分组及干预：用0.25%胰酶消化收集同一代贴壁细胞,制成细胞悬液计数后,随机分为空白对照组(不加干预)；Fis组(分别加入5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml浓度的Fis)；H2O2组(加入300μmol/L过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2)); Fis+H2O2组(先加入5μg/ml、10μg/ml、20μg/mlFis,1小时后加入300μmol/L H2O2共同培养)。(3)形态学观察：培养12h和24h后倒置显微镜观察以上各组细胞的形态学改变,随机照相(×100倍,×200倍),对比各组细胞形态学变化。(4)Fis对HLECs增殖的观察：采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法分别检测Fis在有或无H2O2作用12小时和24小时后对HLECs增殖的影响。(5)Fis对H202诱导的HLECs凋亡的观察：采用异硫氰酸(FITC-Annexin-v, Annexin-V)和碘化丙锭(Propidium Iodide, PI)标记的双染色免疫荧光法,流式细胞术(flow cytometric analysis, FCM)检测Fis在与H202共同作用24小时后HLECs凋亡率的变化。结果：(1)与空白对照组比较,加入5～20μg/mlFis培养12小时和24小时,对HLECs的增殖无明显影响(P>0.05),细胞形态无明显变化。(2)与空白对照组比较,H2O2组较多细胞出现细胞密度降低以及典型的细胞形态学改变,细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.01)。加入5-20μg/mlFis预处理组,H2O2诱导的典型形态改变的细胞减少,细胞增殖能力明显改善,并且随时间和Fis浓度的增加作用更明显(P<0.05)；Fis作用24h时,细胞凋亡率逐渐降低,与H2O2组比较,差异有统计学意义(P<0.05),并且随Fis浓度增加作用更明显(P<0.05)。结论：(1)在生理条件下,在一定浓度和作用时间范围内,非瑟酮对HLECs的增殖无明显影响。(2)在氧化应激条件下,在一定浓度和作用时间范围内,非瑟酮能明显改善HLECs的增殖能力,且呈剂量-效应与时间-效应关系。(3)在氧化应激条件下,在一定浓度范围内,非瑟酮能明显抑制HLECs凋亡,且呈剂量-效应关系。
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