禽流感病毒HA基因序列分析及在T4噬菌体的展示

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2001年在广东从发病的鸡、鸭、鸽子、鸵鸟中分离到多株H5N1亚型禽流感病毒,从中选取有代表性的4株,分别命名为A/Chicken/Guangdong/1/2001(H5N1)(缩写为CH)、A/Duck/guangdong/2001/2/(H5N1)(缩写为DK)、A/Pigeon/guangdong/3/2001(H5N1)(缩写为PG)、A/Ostrich/Guangdong/4/2001(H5N1)(缩写为OS).将4个毒株分别接种10日龄SPF鸡胚,结果表明这4个毒株均能使10日龄鸡胚死亡,死亡鸡胚全身出血;取尿囊液做血凝试验,其效价在2<6>-2<8>之间,其血凝活性可被H5亚型阳性血清所抑制.将H5、H9亚型HA1基因分别克隆到质粒pR,再重组到T4噬菌体中,将噬菌体进行扩大培养、纯化后,用SDS-PAGE电泳进行检测,也在47kDa和45kDa处检测到特异带,表明HA1已在T4噬菌体中得到展示.在T4噬菌体中展示的外源蛋白用Western Blot进行检测.在预期的位置检测到一条特异带;用重组T4作为抗原进行包被,通过ELISA的方法也检测到目的蛋白的表达.结果证明所表达的产物能与抗体发生特异反应.提示其可用于制备禽流感的诊断试剂盒.
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