【摘 要】
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目的:建立一种灵敏度高、特异性强、简单快速、低成本检测风疹病毒RNA的方法。方法:选取保守基因E1设计引物,采用逆转录环介导等温扩增(Reverse Transcription-Loop-Mediate
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目的:建立一种灵敏度高、特异性强、简单快速、低成本检测风疹病毒RNA的方法。方法:选取保守基因E1设计引物,采用逆转录环介导等温扩增(Reverse Transcription-Loop-Mediate Isothermal Amplification,RT-LAMP)技术建立了检测风疹病毒RNA的方法,优化RT-LAMP反应体系,并进行特异性、敏感性评估,在此基础上建立依据SYBR Green I显色反应直接判断结果的简便方法。为验证我们建立方法的临床应用价值,最后用建立的方法对103例孕妇血清标本进行检测,并与RT-PCR及ELISA相比较。结果:通过对建立的RT-LAMP扩增风疹病毒RNA反应体系的优化,发现镁离子对RT-LAMP影响较大,其它如甜菜碱、温度等影响不是很大。特异性评估表明仅风疹病毒检测阳性,而双蒸水、人类基因组RNA、丙型肝炎病毒RNA检测均为阴性,酶切鉴定结果进一步证明了扩增的特异性。检测下限约为每反应管10拷贝。103例孕妇血清标本经RT-PCR、RT-LAMP和ELISA检测,分别检出14例、15例和7例。结论:本研究中建立的RT-LAMP检测风疹病毒RNA的方法,特异性强、敏感性高、简便快速且成本低,有望在临床检测中发挥一定的作用。
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