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近年研究发现,位于染色体3p21.3位点的RASSF1(FAS association domain family 1 RASSF1)基因,有多种不同mRNA剪接体,其中RASSFlA是其中主要的一种<[9]>.RASSFlA基因编码RA结构域(Ras-Rap association domain),编码的蛋白对肿瘤有明显抑制作用.现认为,RASSFlA基因是一种抑癌基因.在肿瘤中观察到该基因启动子区异常甲基化,同时肿瘤细胞中其表达经常缺失<[10]>.目前,对RASSFlA在胶质瘤中的研究还少报道.在胶质瘤中,RASSFlA的表达情况如何?其启动子区甲基化情况如何?如何存在RASSFlA表达缺失,启动子区甲基化是否是其发生的主要机制呢?因此,该课题开展对RASSFlA基因在胶质瘤中的表达及其启动子区甲基化的研究.为研究RASSFlA在胶质瘤中的表达,该实验采用SYBR Green I荧光染料,建立检测RASSFlA mRNA的实时定量PCR的方法<[11]>.构建克隆载体作为定量模板Roche LightCycler定量检测不同恶性程度脑胶质瘤组织和正常脑组织标本.48例不同恶性程度脑胶质瘤组织中有5例检测不出,与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶基因GAPDH(glyceraldehycle-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)比较后,其余RASSFlA mRNA的表达范围从0.08~1.00/μg,均值为0.50±0.004/μg.6例正常脑组织标本均有RASSFlA mRNA的表达,范围从0.70~1.80/μg,均值为1.05±0.08/μg.各期胶质瘤中RASSFlA的mRNA的表达水平均低于正常脑组织组,但胶质瘤不同病理级别组之间的差异无显著意义.U25l细胞株表达RASSFlA基因.已有文献报道RASSFlA基因表达缺失伴随着基因启动子甲基化<[12]>.在成神经管细胞瘤细胞株中,RASSFlA基因启动子发生异常甲基化导致基因表达缺失<[13]>.为了比较RASSFlA基因启动子甲基化在胶质瘤中发生的频率,我们同时对DAPK和P16基因进行了检测.用甲基化特异性PCR方法检测后,RASSFlA、DAPK、P16基因的甲基化频率分别为13/41(31.7﹪),6/41(14.6﹪)和3/41(7.3﹪).RASSFlA、DAPK和P16基因的甲基化程度和患者临床资料的差异无明显统计学意义.28例配对组织标本中,11例RASSFlA基因启动子区甲基化的胶质瘤中有5例其mRNA表达缺失(P=0.005).U251细胞株启动子未发生甲基化.U251细胞株启动子未发生甲基化,同时能检测到RASSFlA基因的表达;胶质瘤标本中,RASSFlA基因启动子区异常高甲基化和其mRNA表达缺失相关,同时,RASSFlA mRNA的表达水平普遍下调.这些实验结果提示:在脑胶质瘤形成过程中,RASSFlA基因启动子区异常高甲基化可能是导致基因表达失活或低表达的机制之一.