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水牛精子耐冻性差,冷冻保存降低了精液的品质,影响了奶水牛在南方大面积推广,而水牛精液冷冻保存稀释液是影响水牛冻精品质的重要因素。因此,找出适合水牛精液冷冻保存的稀释液显得十分迫切。在生产实践中水牛精液冷冻保存使用的稀释液多于黄牛相同,但是水牛精子的理化性质与黄牛有很大不同,水牛的精子耐冻性也比黄牛差。所以,在黄牛冷冻精液稀释液的基础上研究寻找适合水牛精液冷冻保存的稀释液显得非常必要。褪黑激素和维生素C被添加到多种动物精液冷冻保存稀释液中,对精子起到了很好地保护作用。虽未有实验证明维生素D添加到精液冷冻保存稀释液中可以提高冻精品质,但是很多实验证明体内维生素D的含量与精子活率密切相关,精子上也确存在维生素D受体,推测将维生素D加入到精液冷冻保存稀释液中可以提高精液冻后品质。本实验将维生素D和C及褪黑激素单独和两两联合添加到水牛精液冷冻保存稀释液中,检测冻后精子活率、精子运动性能和精子畸形率。一、单独添加褪黑激素、维生素D和C对水牛精液冷冻保存效果的影响1.在水牛精液冷冻保存稀释液中添加三种浓度(10-3,10-4,10-5mol/L)的褪黑激素,发现低浓度(10-5mol/L)的效果较好,冻后活率显著高于对照组(P<0.05),其活率(58.0%)比对照组(46.7%)提高24.3%。2.在水牛精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度(10-3,10-4,10-5mol/L)的维生素D,发现中浓度(10-4mol/L)的效果较好,冻后活率显著高于对照组(P<0.05),其活率(56.4%)比对照组(46.7%)提高20.9%。3.在水牛精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度维生素C(4.00,0.40,0.04g/L)维生素C,发现高浓度(4.00和0.40g/L)的效果较好,冻后活率显著高于对照组(P<0.05),其活率(59.7%)比对照组(46.7%)提高28.0%。二、褪黑激素、维生素D和C两两联合应用对水牛精液冷冻保存效果的影响1.在水牛精液冷冻保存稀释液中添加褪黑激素与维生素C可以提高水牛冻精品质,且比单独添加褪黑激素或维生素C的效果好。浓度为10-4mol/L的褪黑激素与0.40g/L维生素C联合添加效果最好,VCL、VSL、VAP也显著高于对照组(P<0.05),冻后活力在所有处理组中最高(P<0.05),其活率(63.2%)比对照组(46.7%)提高35.5%。2.在水牛精液冷冻保存稀释液中同时添加褪黑激素与维生素D可以提高水牛冻精品质,但并没有单独添加褪黑激素或维生素D效果明显。3.在水牛精液冷冻保存稀释液中同时添加维生素D和C可以提高水牛冻精品质,但并没有单独添加褪黑激素或维生素D的效果明显。