论文部分内容阅读
目的: 葡萄膜炎是一种常见的自身免疫性眼病.实验性自身免疫性葡萄膜炎(recurrent experimental autoimmune uveitis,EAU)主要致炎因子为Th17,目前发现调节性B细胞(Regulatory Bcells,Breg)可抑制Th17的分化及活性.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种具有免疫调节功能的成体干细胞,可调节多种免疫细胞的增殖和功能.本研究通过建立动物模型研究Th17及Breg细胞在诱导大鼠自身免疫性葡萄膜炎过程中的作用,并观察MSCs对EAU的治疗效果. 方法: 1.MSCs培养:将SD大鼠骨髓间充质干细胞分离出来,并进行培养鉴定. 2.动物模型建立:Lewis大鼠36只,各12只.MSCs干预组:光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptorbinding protein,IRBP)与弗氏完全佐剂(CFA)等体积混合并充分乳化后,尾静脉(1ml)+双侧大腿肌肉(各0.5ml)注射建立EAU动物模型,同时腹腔注射2mlMSCs悬液进行干预.模型对照组:相同方法建立EAU动物模型,同时腹腔注射2mlPBS进行干预.正常对照组;同部位同体积注射PBS建立模型,同时腹腔注射2mlPBS进行干预. 3.临床观察:动物模型建立后,从第3天起每日在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部,并按照Caspi临床分级进行评分. 4.组织病理学观察:正常对照组、MSCs干预组及模型对照组各4只,在动物模型建立后第7、14、21天分别处死,摘除眼球制备视网膜组织切片,并用HE染色后观察,按照Caspi组织学分级法进行评分. 5.细胞因子检测:将大鼠麻醉后,取外周血,离心取上清,ELISA法检测血清中IL-17、IL-10、TGF-β的表达. 6.Th17细胞和Breg细胞检测:大鼠过量麻醉后,取外周血裂解后制成细胞悬液,摘除脾脏,研磨后分离细胞,流式细胞仪检测Th17细胞和Breg细胞的比例. 结果: 1.成功分离MSCs并用流式细胞仪鉴定. 2.成功建立EAU动物模型. 3.与模型对照组相比,MSCs干预组各个时间点大鼠眼部炎症表现均减轻(P<0.05);视网膜组织病理学炎症反应均减轻.(P<0.05). 4.与模型对照组相比,MSCs干预组在各个时间点血清ELISA检测IL-17含量均降低(P<0.05),IL-10、TGF-β含量均升高(P<0.05). 5.与模型对照组相比,MSCs干预组在各个时间点流式细胞仪检测Thl7细胞比例均降低(P<0.05),Breg细胞比例均升高(P<0.05). 结论： Th17和Breg细胞的比例与EAU的发生、发展密切相关.MSCs治疗能够降低Th17、升高Breg在淋巴细胞中的比例,从而抑制EAU大鼠体内IL-17的分化及活性,提高IL-10、TGF-β的增殖与活性,抑制EAU炎症反应.