创伤性脊髓损伤后β2--spectrin蛋白表达水平对损伤面积的影响

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目的:  探究SCI后损伤时间与外周血DNA的5hmC的修饰水平的联系。研究脑部spectrin蛋白抑制剂7-NI对SCI后脊髓组织内β2-spectrin蛋白表达的影响。探究抑制β2-spectrin蛋白的表达后脊髓组织切片的损伤面积的改变。  方法:  建立小鼠的脊髓损伤模型。随机挑选28只雌雄各半的6-8周龄ICR小鼠,根据不同的处死时间分成7小组(伤后1h组,伤后6h组,伤后12h组,伤后24h组,伤后3d组,伤后7d组,对照组7d),每组4只小鼠。按照之前分组的时间点处死小鼠并取外周血液,-80℃储存。通过试剂盒取得各个时间点血液的DNA做斑点杂交(Dot blot)实验。随机选取12个雌雄各半的6-8周龄的ICR小鼠,分成两组,SCI组,SCI+7-NI组。①SCI+7-NI组:手术咬除椎板,充分使脊髓组织暴露,在脊髓损伤造模之前5分钟,使用1ml的注射器将0.1ml的spectrin蛋白抑制剂7-NI(浓度为1mg/ml)腹腔内注射,再进行脊髓损伤造模。②SCI组:手术咬除椎板,充分使脊髓组织暴露,仅仅进行脊髓损伤造模,不腹腔内注射药物。等到损伤后24h时间点进行处死,小心取出完整的脊髓损伤节段的脊髓组织,-80℃冰箱保存。提取SCI+7-NI组以及SCI组脊髓组织内的蛋白进行蛋白印迹法实验(Western blot)。随机选取32只雌雄各半的6-8周龄的ICR小鼠,根据不同的操作分成,对照组,7-NI组,SCI+7-NI组,SCI组。①SCI+7-NI组:手术咬除椎板,充分使脊髓组织暴露,在脊髓损伤造模之前5分钟,使用1ml的注射器将0.1ml的spectrin蛋白抑制剂7-NI(浓度为1mg/ml)腹腔内注射,再进行脊髓损伤造模。②7-NI组:手术咬除椎板,充分使脊髓组织暴露,仅仅使用1ml的注射器将0.1ml的spectrin蛋白抑制剂7-NI(浓度为1mg/ml)腹腔内注射,不进行脊髓损伤造模。③SCI组:手术咬除椎板,充分使脊髓组织暴露,仅仅进行脊髓损伤造模,不腹腔内注射药物。④对照组:仅仅手术咬除椎板,充分使脊髓组织暴露,既不进行脊髓损伤造模,也不进行腹腔内药物注射。等到损伤后24h时间点进行处死,小心取出完整的脊髓损伤节段的脊髓组织,短暂放入-20℃冰箱内速冻后切成0.1mm左右的厚度的薄片。通过TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)进行染色后,对切片显示的脊髓坏死面积进行观察计算。  结果:  小鼠脊髓损伤模型造模完成。外周血全基因组DNA的5hmC水平随损伤后时间改变而改变,并且在SCI后24小时达到最高。与SCI组相互比较,腹腔注射7-NI能抑制脊髓损伤后β2-spectrin的表达。7-NI处理后的脊髓损伤的坏死面积增大。  结论:  本研究完成了小鼠脊髓损伤模型造模,证明了SCI之后全血中5hmC修饰水平随损伤后时间改变而改变,在24小时达到最高;同时证明了7-NI能够抑制SCI后β2-spectrin表达,并且抑制β2-spectrin表达会加重SCI后的神经损伤和增加坏死面积。
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