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目的：支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，以气道高反应性(airway hyperresponsiveness, AHR)为主要病理特征，而气道炎症在AHR中起重要作用。有证据表明炎症因子可能引起气道平滑肌(airway smooth muscle, ASM)内在特性发生改变从而诱导AHR发生和发展。TNF-α作为一种具有广泛活性的促炎症因子，参与哮喘的病理过程，可诱导气道炎症、支气管收缩和AHR，但其在AHR中的发病机制尚未阐明。本论文阐述TNF-α在小鼠AHR中的作用机制，深入探讨其对小鼠ASM收缩的影响，为相关疾病如哮喘或AHR的发病机制及疾病治疗提供理论依据。
方法：气管组织张力测量实验探讨TNF-α对小鼠气管组织收缩的影响，实验中首先取小鼠完整气管和去上皮气管组织，观察并记录TNF-α对不同浓度CCh(10-8~10-5M)诱导的气管收缩反应的影响。其次观察并记录PKC抑制剂GF109203X、Src抑制剂PP2和VDCC阻断剂Nifedipine对TNF-α诱导的气管收缩反应的影响。原代分离、培养小鼠气道平滑肌细胞并鉴定。RT-PCR和qPCR检测TNF-α对小鼠气管组织中PKC亚型PKCα、Src和VDCC亚型CaV1.2mRNA表达的影响。Westernblot检测TNF-α对小鼠气管组织和气道平滑肌细胞中Src蛋白表达的影响。Westernblot检测小鼠气道平滑肌细胞中TNF-α对CaV1.2蛋白表达的影响。
结果：气管组织张力测量结果显示TNF-α可增强CCh诱导的小鼠气管收缩反应，该作用不依赖于气道上皮。GF109203X、PP2均可明显抑制TNF-α诱导的小鼠气管收缩增强反应。Nifedipine引起的气管舒张效应在TNF-α处理的气管组织中更明显。RT-PCR和qPCR结果显示TNF-α可诱导小鼠气管组织PKCα、Src、CaV1.2mRNA表达上调。Westernblot结果显示TNF-α诱导气管组织和平滑肌细胞中Src蛋白表达明显升高，该效应可受到GF109203X的抑制。TNF-α可诱导平滑肌细胞中CaV1.2蛋白表达升高。
结论：(1)TNF-α可诱导小鼠气管收缩增强；(2)TNF-α诱导PKC激活，上调Src的表达；(3)TNF-α诱导CaV1.2表达上调。
方法：气管组织张力测量实验探讨TNF-α对小鼠气管组织收缩的影响，实验中首先取小鼠完整气管和去上皮气管组织，观察并记录TNF-α对不同浓度CCh(10-8~10-5M)诱导的气管收缩反应的影响。其次观察并记录PKC抑制剂GF109203X、Src抑制剂PP2和VDCC阻断剂Nifedipine对TNF-α诱导的气管收缩反应的影响。原代分离、培养小鼠气道平滑肌细胞并鉴定。RT-PCR和qPCR检测TNF-α对小鼠气管组织中PKC亚型PKCα、Src和VDCC亚型CaV1.2mRNA表达的影响。Westernblot检测TNF-α对小鼠气管组织和气道平滑肌细胞中Src蛋白表达的影响。Westernblot检测小鼠气道平滑肌细胞中TNF-α对CaV1.2蛋白表达的影响。
结果：气管组织张力测量结果显示TNF-α可增强CCh诱导的小鼠气管收缩反应，该作用不依赖于气道上皮。GF109203X、PP2均可明显抑制TNF-α诱导的小鼠气管收缩增强反应。Nifedipine引起的气管舒张效应在TNF-α处理的气管组织中更明显。RT-PCR和qPCR结果显示TNF-α可诱导小鼠气管组织PKCα、Src、CaV1.2mRNA表达上调。Westernblot结果显示TNF-α诱导气管组织和平滑肌细胞中Src蛋白表达明显升高，该效应可受到GF109203X的抑制。TNF-α可诱导平滑肌细胞中CaV1.2蛋白表达升高。
结论：(1)TNF-α可诱导小鼠气管收缩增强；(2)TNF-α诱导PKC激活，上调Src的表达；(3)TNF-α诱导CaV1.2表达上调。