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腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)是终末期肾脏病(End stage renal disease,ESRD)患者的一种替代治疗。腹膜作为一层半渗透膜充当溶质与水的交换屏障,因长期暴露在腹透液(Peritoneal dialysis fluid,PDF)中,以及腹膜炎与腹腔积血的反复发作,不断损伤腹膜并导致腹膜纤维化(peritoneal fibrosis,PF),最终使患者退出腹膜透析。在这个多因素调节的病理过程中,腹膜上皮间皮-间充质转分化(epithelial-mesenchymal-transitions EMT)不论在诱发腹膜纤维化,还是腹膜功能持续恶化中都起着重要的作用。研究表明,硫酸吲哚酚(Indoxyl sulfate,IS)可与EMT相关的器官纤维化,包括心血管、肾脏、成骨细胞中发挥作用。然而,在腹膜间皮细胞EMT与腹膜纤维化中IS的作用仍不清楚,本课题对IS在腹膜间皮细胞转分化中的机制进行了相关的研究。【目的】硫酸吲哚酚IS刺激人腹膜间皮细胞永生化细胞株(HMrSV5)后,观察细胞形态变化并研究IS对腹膜间皮细胞上皮细胞-间充质转分化(EMT)的作用机制,同时探索转化生长因子β1(TGF-β1)在细胞转分化中的作用。【方法】体外培养HMrSV5,传代后,随机将人腹膜间皮细胞株分成以3组:(1)对照组(PDF组):加入4.25%腹膜透析液与培养液共培养,不加入其它试剂;(2)IS处理组:分别用含250umol/LIS、500umol/LIS、1000umol/LIS浓度的培养液与4.25%腹膜透析液共培养;(3)TGF-β1受体抑制剂(Transforming growth factor-βR1 inhibitor,TRI)组:用含2umol/L LY364947+IS的培养液与4.25%腹膜透析液共培养。分别在培养0h、4h、12h、24h、48h、72h时间下,用细胞免疫荧光法观察细胞形态变化,然后用Western Blot方法再次验证细胞α-SMA蛋白的表达规律,上述实验结束后,选取α-SMA蛋白表达高峰所在时间点,提取细胞上清液并用ELISA法测定纤维连接蛋白(Fibronectin,FN),层粘连蛋白(laminin5,LN5)两种基质蛋白的分泌情况。【结果】(1)IS剌激细胞后,细胞由鹅卵石,典型的铺路石样,逐渐变细变长,呈梭形改变,同时IS处理组α-SMA的表达较对照组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);(2)IS刺激细胞48h后,基质蛋白FN、LN5的分泌增加,差异有统计学意义(P<0.05);(3)TGF-β1受体抑制剂作用下,细胞转分化标记物α-SMA表达及FN、LN5分泌较IS处理组显著减少,差异均具有有统计学意义(P<0.05)。【结论】(1)IS可刺激腹膜间皮细胞α-SMA表达及FN、LN5分泌增多,而TGF-β1受体抑制剂对α-SMA表达及FN、LN5分泌均有抑制作用;(2)IS可诱导腹膜间皮细胞发生EMT,TGF-β1可能参与了细胞的转分化过程。