【摘 要】
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水稻白叶枯病是世界水稻生产中最严重的细菌性病害。该病由革兰氏阴性菌黄单胞水稻变种(Xanthomonas oryzae pv. Oryzae,Xoo)引起,是我国水稻主产区的三大病害之一。目前,控
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水稻白叶枯病是世界水稻生产中最严重的细菌性病害。该病由革兰氏阴性菌黄单胞水稻变种(Xanthomonas oryzae pv. Oryzae,Xoo)引起,是我国水稻主产区的三大病害之一。目前,控制水稻白叶枯病最经济有效的方法是种植抗病品种。然而白叶枯病菌的变异性很强,使得品种的抗病性很容易丧失。因此深入研究白叶枯病菌的致病机理和品种的抗性机制,并在此基础上与育种、病害防控结合起来,对经济有效的控制水稻白叶枯病爆发流行具有重要意义。本研究以抗病品种疣粒野生稻(Oryza meyeriana)和感病品种日本晴(Oryza sativa L. ssp. japonica cv. Nipponbare)为研究对象,建立了荧光双向电泳技术体系,分析抗病品种疣粒野生稻悬浮细胞在白叶枯病菌胁迫下24h的外分泌蛋白质组变化。主要研究内容如下：1.建立适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞系外分泌蛋白质提取方法：利用苯酚结合甲醇醋酸铵沉淀法提取外分泌蛋白,此法在外分泌蛋白的得率,双向电泳的分辨率及重复性上均优于三氯乙酸-丙酮沉淀法及硫酸铵沉淀法。2.利用荧光双向电泳技术研究方法分析水稻抗病品种细胞系受水稻白叶枯胁迫后外分泌蛋白的变化：我们共发现有114个蛋白点的表达量发生显著变化,其中34个蛋白点的表达量上调,70个蛋白点的表达量下调。质谱成功鉴定95个蛋白质,分类后获得28个蛋白质点的相关信息,其中25个由疣粒野生稻合成。在这25个外分泌蛋白质中,18个蛋白点的表达量上调,7个蛋白点的表达量下调。3.生物信息学分析表明,抗病品种疣粒野生稻悬浮细胞受白叶枯胁迫后分泌的25个蛋白质分别为：抗病蛋白、防御蛋白、细胞加固蛋白、活性氧代谢蛋白、多糖代谢蛋白、蛋白修饰蛋白,还有些蛋白参与信号转导及基因的转录调控等过程,推测这些外分泌蛋白在疣粒野生稻抗病过程中具有重要作用,这些实验结果为进一步研究疣粒野生稻抗病机制奠定了基础。
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