激光诱导荧光毛细管免疫电泳技术检测盐酸克伦特罗

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本文根据免疫分析和毛细管电泳分离的原理,建立了灵敏、准确的盐酸克伦特罗快速分析新方法。通过将盐酸克伦特罗与牛血清蛋白偶联以增大抗原的分子量,再将偶联物用异硫氰酸荧光素(FITC)进行标记,制得荧光抗原,解决了小分子化合物的荧光标记与免疫分离的困难。对不同分离模式和影响免疫电泳分离的各种因素(包括免疫条件、缓冲溶液pH值和浓度、分离电压等)进行了优化。得到的最佳电泳条件为:采用胶束电泳,通过极端pH避免蛋白在管壁的吸附,电泳缓冲液50mM硼酸+20mMCAPS+40mMSDS,pH9.3;分离电压为30kV;分离温度为20℃。在最佳条件下,电泳分离过程在8分钟内完成,标准偏差在0.88~1.2%之间,回收率在88~93.7%之间,检测限为0.7ng/ml。在离线免疫分析方法的基础上,建立了在线免疫分析的方法,使免疫反应与分离检测同步进行,简化了步骤,提高了灵敏度。通过优化进样量和进样次序等参数,整个分析的时间缩短至8分钟,标准偏差在0.56~2.8%之间,回收率在90~102%之间,检测限为0.2ng/ml。该方法通过检测人尿液和小鼠肌肉组织提取液中的瘦肉精验证。
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