真姬菇微卫星分子标记的开发及其种质资源分析

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真姬菇(Hypsizygus marmoreus)是著名的食药用菌,具有广阔的开发利用前景。目前通过人工驯化和栽培实验,真姬菇已经实现了人工栽培,而且我国、日本和韩国等国家和地区的一些大型食用菌企业,都可以在人工控制温度、湿度、光照和空气成分的环境中,实现真姬菇的工业化栽培。作为重要的栽培菌株,客观评价真姬菇栽培菌株种质资源的遗传多样性,掌握不同栽培菌株的鉴别方法,是充分保护和利用真姬菇种质资源,开展真姬菇良种选育,保护真姬菇品种知识产权,加强真姬菇菌种质量管理的基础。本研究从全国范围内收集了真姬菇27个主要栽培菌株,其中包括21株常规栽培真姬菇菌株和6株工业化栽培真姬菇菌株。根据形态学特征和ITS序列对所收集的真姬菇菌株进行了分类鉴定,利用SSR分子标记对真姬菇的种质资源进行分析研究。主要研究结果如下:1.一部分形态特征(细密花斑,菜盘型等)可以将工业化栽培菌株与常规栽培菌株区分开;但两者仍具有一些相同的形态特征,如菌盖为伞型,菌盖土黄色等。2.对供试菌株的ITS区域进行测序和比较分析,结果显示供试菌株的ITS序列长度为594bp,通过blast比对发现在种的水平上证明菌株来源准确。用PHILIP软件分析发现菌株间的相似系数约为99%,说明利用单一的ITS序列不能将菌株区分开。3.利用简单重复序列(SSR)标记技术,以27个真姬菇菌株为供试材料,根据香菇、糙皮侧耳、灰盖鬼伞基因组序列设计引物,对真姬菇供试菌株进行转移扩增。从54对引物中筛选出23对能够扩增出稳定带型且菌株之间带型差异明显的SSR引物。利用23对引物对全部供试菌株进行扩增,共扩增133条条带,其中多态性条带为108条,多态性比率达到81.2%。UPGMA聚类分析结果表明,大部分常规栽培菌株(95%)和工业化栽培菌株(80%)聚在不同组,说明两者之间的遗传背景存在明显差异。4.根据获得的菌株特有的SSR标记分析表明,2个工业化栽培菌株各自具有一条特异条带,通过引物组合法,利用7对引物,可以将其他工业化栽培菌株与常规栽培菌株区分开。5.将所获得的SSR标记的图谱转化为较为直观的指纹图谱会使真姬菇种质资源的鉴定、品种登记更加方便快速。
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