论文部分内容阅读
Ghrelin是由动物胃黏膜泌酸腺区X/A样内分泌细胞分泌的由28个氨基酸组成的多肽。大量研究表明Ghrelin在促进动物的生长激素释放、能量平衡、采食及体增重的长期调控方面起着重要作用。为研究Ghrelin的促生长效应，本研究构建了sGhlelin基因真核和原核表达质粒，并研究其在大鼠中的促生长作用及其对家兔激素水平的影响。
通过RT-PCR方法获得sGhlelin基因cDNA片段，克隆到pMD18-Tsimplevector中进行序列测定得到sGhlelin基因编码cDNA全序列。然后通过双酶切方法将sGhlelin基因分别克隆到pcDNA3.1(+)和pET-32a质粒中构建成真核表达质粒pcDNA-sGhl和原核表达质粒pET-sGhl。
将重组质粒pET-sGhl转入表达细菌BL21(DE3)中，重组菌标记为pET-sGhl-BL21。将重组菌用IPTG诱导表达，用超声波破碎分析。将融合蛋白变性后用50﹪Ni-NTA树脂过柱纯化，将洗涤部分进行SDS-PAGE检测。从分子量与纯化结果这两方面间接地证明表达的蛋白即为目的蛋白，说明目的融合蛋白能在重组菌中正确表达。
抽提重组质粒pcDNA-sGhl用高压灭菌的PBS溶解后用于动物试验。用普通注射器直接注射到大鼠和新西兰兔后腿肌肉中试验，得出其对大鼠的促生长作用及其对家兔激素水平的影响。