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目的：体外建立健康成人末梢血单核细胞经唑来膦酸(Zol)和重组人IL-2诱导γδT细胞(γδT cells)的优势培养体系,检测经不同药物浓度(0ul/ml、1ul/ml、10ul/ml、20ul/ml、100ul/ml)参芪扶正注射液(SQ)处理后对γδT细胞的增殖以及细胞表面标志表达功能的影响. 方法：无菌条件下取3份健康成人末梢血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),分为AB两大组：每组各分为4小组,AB组均在分离当天加入不同浓度唑来膦酸(0uM,1uM,3uM,5uM),A组当天加入1000IU/ml rhIL-2;B组5天后加入1000IU/ml rhIL-2.第0,2,4,7,10天采用直接细胞计数法比较AB各组细胞的增殖速度,10天后用流式细胞仪鉴定AB各组γδT细胞纯度并检测细胞膜表面CD3,CD107a和CD44的表达;根据流式结果,选择γδT细胞生长优势组添加不同浓度的参芪扶正注射液,分别记为SQ-γδT-I组(0ul/ml)、SQ-γδT-II组(1ul/ml)、SQ-γδT-III组(10ul/ml)、SQ-γδT-IV组(20ul/ml)、SQ-γδT-V组(100ul/ml)培养48小时后再用流式细胞仪鉴定γδT细胞的纯度以及检测细胞表面CD3、CD107a和CD44的表达; 结果：1.γδT细胞的形态分析：显微镜下显示在体外扩增4天后即可见细胞形成小的细胞簇,单个细胞成类圆形和梭型,有贴壁的,也有部分悬浮的,培养第10天后可见形成大的团簇,提示唑来膦酸联合rhIL-2在体外可有效扩增γδT细胞.2.流式细胞仪鉴定各组γδT细胞纯度及CD3,CD44,CD107a的表达：(唑来膦酸浓度为1uM,且rhIL-2延迟5天加入的细胞(B2组),和唑来膦酸浓度为0uM的细胞(A1组,B1组)由于细胞量未达到1*106个/ml,未行流式检测)A4(Zol浓度=5uM,分离PBMC当天加入rhIL-2)：γδT=60.28±4.37,CD3=98.62±1.29,CD44=98.21±1.31,CD107a=50.03±3.37;B4(Zol浓度=5uM,分离PBMC5天后加入rhIL-2)：γδT=44.87±6.33,CD3=96.14±1.99,CD44=98.38±0.945,CD107a=41.56±4.83;A3(Zol浓度=3uM,分离PBMC当天加入rhIL-2)：γδT=42.33±6.11,CD3=91.16±5.513,CD44=92.42±4.74,CD107a=35.43±4.39;B3(Zol浓度=3uM,分离PBMC5天后加入rhIL-2)：γδT=37.07±2.61,CD3=87.47±2.15,CD44=90.62±4.83,CD107a=30.39±4.29;A2(Zol浓度=1uM,分离PBMC当天加入rhIL-2)：γδT=19.59±5.04,CD3=90.32±4.17,CD44=94.64±1.45,CD107a=20.97±6.35;根据实验结果可知：a A4组(Zol浓度=5uM,分离PBMC当天加入rhIL-2)γδT细胞的纯度及表面CD3,CD107a的表达的优于其余组合(P<0.05),为实验优势组;b A4组和B4组的CD44无明显差异,A3组和B3组的CD44无明显差异.3.不同浓度参芪扶正注射液对γδT细胞纯度及表面标志表达的影响：SQ-γδT-Ⅰ组(SQ=0ul/ml)：γδT=58.39±3.96,CD3=88.49±5.95,CD44=90.91±5.81,CD107a=47.85±7.59;SQ-γδT-Ⅱ组(SQ=1ul/ml)：γδT：=60.02±3.55,CD3=89.92±3.82,CD44=91.58±2.09,CD107a=64.57±8.74;SQ-γδT-Ⅲ组(SQ=10ul/ml)：γδT=70.94±3.65,CD3=95.87±2.30,CD44=92.88±5.67,CD107a=70.94±2.78;SQ-γδT-Ⅳ组(SQ=20ul/ml)：γδT=77.11±2.35,CD3=92.95±2.01,CD44=92.02±1.52,CD107a=79.14±4.49;SQ-γδT-Ⅴ组(SQ=100ul/ml)：γδT：=34.76±3.59,CD3=84.41±4.35,CD44=83.89±5.03,CD107a：71.12±10.51;根据实验结果可知：a：参芪扶正注射液在浓度1ul/ml、10ul/ml、20ul/ml时对γδT细胞的纯度及表面CD107a的表达有促进作用(P<0.05),且在参芪扶正注射液浓度为20ul/ml时表达最佳.b：加入参芪扶正注射液10ul/ml对γδT细胞CD3的表达影响最明显(P<0.05),且在浓度为10ul/ml～20ul/ml时的表达作用相似(P>0.05),c：参芪扶正注射液在浓度1ul/ml～20ul/ml时对CD44的表达影响相似(P>0.05).d：参芪扶正浓度在100ul/ml时对γδT细胞的纯度及CD3,CD107a,CD44有抑制作用(P<0.05),e：γδT细胞表面表达的CD3、CD44在第10天时优于第12天的表达(P<0.05),而第10天和第12天γδT细胞的纯度及表面CD107a的表达相似(A4组和SQ-γδT-I组相比)(P>0.05). 结论：唑来膦酸联合rhIL-2可以成功诱导出γδT细胞,参芪扶正注射液在浓度1ul/ml～20ul/ml时可以提高γδT细胞纯度并增加表面标志表达,而在浓度100ul/ml时抑制γδT细胞的纯度及表面标志表达.