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蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在一类能作用于血液凝固酶促级联反应过程中的一个或多个环节的酶，即可激活FV、FVII、FIX、：FX、FII或直接使纤维蛋白原凝集(类凝血酶)的促凝组分。蝰科、响尾蛇科及眼镜蛇科的蛇毒素中含有各种激活凝血因子X的组分。目前已经有10余种的蛇毒FX激活组分被分离纯化及定性，主要来自Cerastes cerastes、Vipera berus berus、Vipera lebetina、 Bungarus fasciatus、King Cobra、Vipera russellii。圆斑蝰蛇(Vipera russellii)隶属爬行纲(Reptilia)，有鳞目(Squamata)，蝰科(Viperidae)，蝰亚科(Viperinae)，蝰属(ViperaLaurenti)，英文名称为Russell'sviper。目前Esnouf和Williams、杨丽娟等以及孙环环等，均报道已从该种属蛇毒中分离纯化得到凝血因子X激活物。三者分离纯化的凝血因子X激活物均不同，其中Esnouf和Williams报道的RVV-X研究最为深入。然而，目前还没有哪一个来自蝰亚科的FXa被开发利用于临床。蝰蛇各亚种资源丰富，开发蝰蛇来源的止血制剂具有重要的意义。
目的：
本文选用了圆斑蝰蛇(缅甸亚种)的蛇毒干粉，从中分离纯化出一个小分子量的凝血因子X(FX)激活物，并研究其理化性质、凝血机制等方面内容。
方法：
1．蝰蛇(缅甸亚种)蛇毒粗毒经过CM-SephMex C-50阳离子交换层析， Superdex<'TM >75凝胶层析及再次Superdex<'TM> 75凝胶层析纯化分离得到蝰蛇(缅甸亚种)蛇毒FVe-1；
2．Tricine-SDS-PAGE鉴定其纯度；
3．质谱MALDI-TOF-TOF-MS测定分子量；
4．等电聚焦电泳测定等电点；
5．按Williams和Esnouf的方法研究FV e-1对兔贫血小板血浆的凝血作用；
6．特异性底物法研究FV e-1对凝血因子X、凝血酶原的激活作用；
7．按Rong Gao和Manjunatha的方法研究FVe-l对纤维蛋白原作用；
8．按Astrup T.和Mullertz S．的纤维平板法研究FVe-1对纤维蛋白的作用；
9．特异性底物法测定不同温度、不同pH、不同浓度钙离子以及不同抑制剂对FVe-1酶活性影响；
10．FVe-1通过Tricine-SDS-PAGE转至PVDF膜，采用Edman降解法测定FVe-1的N端序列，再利用http：//www．ncbi．nlm．nih．gov/BLAST/Blast．cgi的系统进行蛋白质序列同源性比对。
结果：
1．蝰蛇蛇毒经过CM-SephMex C-50阳离子交换层、Superdex<'TM>75凝胶层析、再次Superdex<'TM> 75凝胶层析分离得到具有促凝作用的凝血组分(FVe-1)，为单链蛋白质，其分子量为13808.171 Da，等电点为4.6；
2．FVe-1可促使血浆凝固，呈量效、时效关系；
3．FVe-1可激活人凝血因子X，不能激活凝血酶原，不降解纤维蛋白原和纤维蛋白；
4．染色检测显示FVe-1中不含有糖基化成分；
5．FVe-1的适宜pH为6.5-7.5，适宜温度为25-60℃，其酶活性为钙依赖性；
6．EDTA和DTT都可以不同程度的抑制FVe-1的酶活性；
7．FVe-1的N端序列为NH<,2>N-L-V-Q-F-G-E-M-I-N。
小结：
1．蝰蛇蛇毒经过CM-Sephadex C-50阳离子交换层、Superdex<'TM>75凝胶层析、再次Superdex<,TM> 75凝胶层析分离得到具有促凝作用的凝血组分(FVe-1)；
2．FVe-1可促使血浆凝固，呈量效、时效关系。该效应是通过激活人凝血因子X产生的；
3．Fve-1为单链金属蛋白酶，分子量13808.171 Da，等电点4.6；酶活性的适宜 pH为6-5-7-5，适宜温度为25-60℃，为钙依赖性；FVe-1的N端序列为 NH<,2.-N-I,-Y-Q-F-G-E-M-I-N。