新型化学发光体系检测特定序列DNA和荧光免疫分析法检测乳腺癌标志物

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特定序列DNA检测和免疫分析在疾病早期诊断领域扮演着重要的角色,发展新型的特定序列DNA检测和免疫分析方法具有重要的意义。本文主要建立了一种新型化学发光方法检测特定序列DNA和一种荧光免疫分析法检测乳腺癌标志物。  首先,建立了一种新型的化学发光体系,即新型增强剂溴酚红和BSA共同增强的luminol-H2O2-HRP化学发光体系。相对于luminol-H2O2-HRP化学发光体系的经典增强剂对碘苯酚(p-Iodophenol,PIP)而言,该新型体系具有更高的灵敏度。我们讨论了其增强机理,并最终将该体系应用到了乙型肝炎病毒特定序列DNA的检测中,其检测限低至0.4 fmol。  之后,建立了一种检测乳腺癌标志物的荧光免疫分析法。该方法步骤简单,无需任何洗涤步骤,可为试剂盒早期开发提供基础。本实验中,将抗体标记在羧基修饰的荧光量子点表面,将乳腺癌标志物标记在氧化石墨烯表面,经过抗体抗原特异性反应,荧光量子点可结合到氧化石墨烯表面从而导致荧光淬灭。当加入待测物质即游离的乳腺癌标志物时,游离的乳腺癌标志物会与标记在氧化石墨烯上的抗原竞争荧光量子点表面的抗体,从而产生荧光恢复。我们将此方法应用到CEA,CA153和CA125三种乳腺癌标志物的检测中,并分别针对该三种肿瘤标志物的检测方法进行条件优化以及方法学验证,最终成功建立了 CEA,CA153和 CA125三种乳腺癌标志物的检测方法。本实验所选取的荧光量子点为发射光谱互不交叉的三种荧光量子点,交叉实验结果表明所建立方法可以用于同时检测三种肿瘤标志物。
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