高山倭蛙皮肤新型多功能抗菌肽的基因克隆、鉴定与功能分析

来源 :河北师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:archer_zhang
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西藏高原蛙,学名高山倭蛙,捕捉于拉萨—中国的西藏高原。它们主要生活在中国和尼泊尔境内,西藏高原东边和南边的亚热带区域是它们的唯一的栖息地,那里有强烈的紫外线辐射和长时间持续的日光照射。高山倭蛙的生活环境极为严酷,于是我们对其天生的防御体系,即抗微生物和环境应激的能力进行了研究。在本研究中,从高山倭蛙的皮肤分泌物中分离纯化出3种抗菌肽并进行了特征分析。编码抗菌肽cDNA基因的序列也从高山倭蛙皮肤的cDNA文库中得到了克隆。通过进行结构的分析比对,发现其中两种肽属于Japonicin-1家族,分别命名为Japonicin-1Npa(FLLFPLMCKIQGKC)和Japonicin-1Npb(FVLPLVMCKILRKC)。第三种分离到的肽命名为Parkerin,其序列为GWANTLKNVAGGLCKITGAA,它与现有的所有两栖类动物的抗菌肽都没有相似性,是首次报道发现的新家族抗菌肽。本研究对3种抗菌肽的许多种功能进行了检测,如抗微生物活性、抗氧化性、肥大细胞脱颗粒作用(MCD)、溶血活性等等。研究发现,Parkerin对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌以及真菌都有抗性,具有广泛的抗菌活性,并且具有较强的抗氧化活性。Japonicin-1Npa和Japonicin-1Npb抗菌谱较窄,仅对革兰氏阳性菌有较强的抗性,并且只能清除少部分的自由基。另外,3条抗菌肽都仅有极其微弱的溶血活性,却全部都有促使肥大细胞脱颗粒的活性。本实验还使用圆二色光谱(CD谱)对它们的溶液结构进行了检测,并通过扫描电镜(SEM)观察发现,3条抗菌肽的抑菌机制与其功能特征相一致。本研究工作的结果显示,这些新发现的多功能抗菌肽在保护高山倭蛙抵抗环境中氧化应激和病原微生物的过程中起到了很大的作用,同时也揭示了这些高原两栖类动物生态适应性的部分原因。  
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