论文部分内容阅读
目的:1.建立大鼠变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)动物模型2.提供变应性鼻炎模型的鼻粘膜组织形态学特征3.免疫组化测定Toll样受体4和NF-κBp50在大鼠变应性鼻炎及LPS和地塞米松干预后鼻粘膜上的表达情况4.Western blotting检测鼻黏膜组织TLR4蛋白水平表达5.探讨Toll样受体4和NF-κBp50与变应性鼻炎的关系方法:SD大鼠48只,雌雄不限,随机分为4组。①A组(变应性鼻炎组n=12):用OVA致敏、激发建立变应性鼻炎动物模型,模型建立后,改为隔日OVA(10mg/100μL)滴鼻一次维持过敏状态;②B组(变应性鼻炎+LPS刺激组n=12):成功建立为变应性鼻炎模型的大鼠,在激发第7天后隔日滴鼻维持过敏状态,并同时用LPS(10μg/100μL)滴鼻,每日一次,连续7天;③C组(正常对照组n=12):以生理盐水行腹腔注射及滴鼻;④D组(地塞米松处理组n=12):成功建立为变应性鼻炎模型的大鼠,在激发第7天后隔日滴鼻维持过敏状态,并同时用地塞米松1mg/kg后肢肌肉注射,每日一次,连续7天。Wright’s染色观察各组鼻黏膜炎性细胞的浸润情况,并行高倍镜下嗜酸性粒细胞计数;免疫组化测定鼻黏膜组织NF-κBp50表达;Western blotting检测鼻黏膜组织TLR4蛋白水平表达。本实验的数据应用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理,计量资料以x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果: A、B、D组大鼠均成功激发为AR动物模型,模型组Wright’s染色显示大量中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润。鼻黏膜中嗜酸性粒细胞在A,B组明显增多,D组经DEX处理后明显减少。形态学改变:HE染色见正常鼻粘膜上皮为假复层纤毛柱状上皮和复层扁平上皮,由纤毛柱状上皮细胞、杯状细胞、扁平细胞等组成,黏膜下纤维结缔组织很薄,血管数量很少,无炎性细胞浸润及血管改变;模型组及LPS刺激后黏膜增厚显著,小血管增生扩张明显,上皮分泌细胞增多,上皮下大量炎性细胞浸润,黏膜下腺体数量明显增加,腺体扩张;经DEX处理后,黏膜厚度逐渐降低,血管扩张及腺体增生及炎性细胞浸润程度减轻。免疫组化:NF-κBp50在各组中主要分布在鼻黏膜假复层纤毛柱状上皮和固有层的腺体细胞内,表达在胞核和胞质内,染呈棕黄色;TLR4主要分布在鼻黏膜上皮假复层纤毛柱状上皮,腺体细胞以及少许基细胞内,表达在胞膜和胞质内,染呈棕黄色。嗜酸性粒细胞计数:B组表达明显较A、C、D组高(P<0.01),A组表达较C、D组高,C、D间表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化显示各组鼻黏膜中均有NF-κBp50表达,B组表达明显较A、C、D组高(P<0.01),A组表达较C、D组高,C组较D组表达高(P<0.01);TLR4在各组鼻黏膜中均有表达,Western blotting显示B组表达明显较A、C、D组高(P<0.01),A组表达较C、D组高,C、D间表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过OVA多次致敏,局部激发能够成功地建立大鼠变应性鼻炎的动物模型。病理形态学上的改变:变应性鼻炎时,上皮分泌细胞明显增多,黏膜增厚,炎性细胞浸润及嗜酸性粒细胞明显增多,腺体扩张增多,小血管的增加,充血。经DEX处理后,血管扩张及腺体增生及炎性细胞浸润程度减轻。AR大鼠鼻黏膜TLR4和NF-κBp50、嗜酸性粒细胞计数的表达较正常组增高;LPS刺激后TLR4和NF-κBp50的表达、嗜酸性粒细胞计数进一步增高,经DEX处理后表达下调,说明TLR4和NF-κBp50可能参与AR的发病和发展,DEX可能通过下调TLR4及NF-κBp50影响变应性鼻炎的发展。