【摘 要】
：
Wnt信号通路在胚胎发育、细胞增殖和分化过程中和肿瘤发生中起到极其重要的作用。研究表明:大约90％的肠道癌症是由于Wnt信号通路的异常激活引起的,另外有80％的结肠癌是因为APC
论文部分内容阅读
Wnt信号通路在胚胎发育、细胞增殖和分化过程中和肿瘤发生中起到极其重要的作用。研究表明:大约90％的肠道癌症是由于Wnt信号通路的异常激活引起的,另外有80％的结肠癌是因为APC基因的突变导致Wnt信号通路的异常激活而导致的
MYCT1(myc target1)基因最初发现于喉癌细胞中,后因发现其启动子上有两个E-box即c-MYC结合位点,故命名为myc target1。孙开来等人研究发现MYCT1的表达量在喉癌、肝癌等癌症组织中低于相应癌旁组织。MYCT1过表达还能抑制癌细胞的生长,国内研究人员将MYCT1定义为一种抑癌基因。国外研究人员对鼠源的MYCT1蛋白进行研究发现,MYCT1蛋白在许多方面能起到替代MYC蛋白的作用。其功能之强大得到了众多科学家的肯定。
在本研究课题中,我们利用携带有MYCT1 shRNA的非复制型腺病毒对MYCT1在Wnt信号通路及结肠癌发生中的作用进行研究。研究结果表明,MYCT1蛋白能够通过同β-calenin和TCF-4相结合的方式调控Wnt信号通路,并且在SW480的裸鼠皮下结肠癌模型中的实验中,MYCT1在结肠癌的发生及生长中起到了重要的作用。
[实验方法]
本实验室利甩Adeasy系统成功构建出携带有靶向MYCT1 mRNA的非复制型腺病毒,命名为ad-shMYCT1;另外构建一对应非复制型腺病毒ad-shGPF作为对照病毒。构建好的病毒经鉴定正确后,通过在HEK293细胞中扩增,并运用CsCl密度梯度离心纯化得到高低度的病毒。纯化后的病毒运用TCID50法在HEK293中测出其滴度后方可用于实验;运用Western blotting、RT-qPCR和luciferase reporter实验检测ad-shMYCT1对Wnt下游基因转录激活的影响;免疫共沉淀实验被运用于检测MYCT1蛋白相互作用的蛋白;运用裸鼠成瘤实验和免疫组化实验研究MYCT1在结肠癌发生及生长中的作用。
[实验结果]
体外实验结果表明,ad-shMYCT1能够下调Wnt下游基因的mRNA和蛋白表达水平,并能够显著抑制TCF-4转录调控的活性。免疫共沉淀实验表明MYCT1可能依靠与β-Catenin和TCF-4相结合的方式参与Wnt信号通路的调节。体内实验证明,ad-shMYCT1对SW480荷瘤具有良好的治疗效果:实验组裸鼠接受ad-shMYCT1治疗后肿瘤生长受到明显抑制,而注射了PBS或者ad-shGPF后对照组裸鼠肿瘤生长迅速;实验组裸鼠的生存时间也明显比对照组裸鼠的要长。免疫组化实验的结果也证明ad-shMYCT1能够下调结肠癌标志物CD44的表达。
[结论]
本文通过在BJ5183感受态细菌中重组、HEK293细胞中包装产生腺病毒的方法成功得到了不含野生型腺病毒污染的携带有MYCT1 shRNA和GFP shRNA的非复制型腺病毒。实验结果表明:运用ad-shMYCT1下调MYCT1表达能够显著抑制Wnt信号通路的激活,并抑制结肠癌的生长。MYCT1能够作为基因病毒治疗结肠癌一个新的靶点。
其他文献
经皮给药系统具有众多的优点,因而受到越来越多的关注。然而皮肤壁垒限制了经皮给药系统的发展,需要采用化学促进剂或者物理方法对药物进行促渗。本论文从制备巴布剂基质出发,以黄芩苷为药物模型研究了基质的制备与释药性能,并对利用低脉冲电流的物理促渗方法进行了初步探讨,为进一步开发经皮给药剂型奠定基础。首先论文分别以壳聚糖和海藻酸钠为骨架,通过粘接性能和力学性能来探讨巴布剂基质的配方与制备工艺,并通过正交实验
网络技术的发展使得互联网成为现代社会必不可少的重要元素,而“互联网+”时代则将互联网技术与现代社会的生活、生产、消费方式紧密结合并使之发生了巨大变革和重大改进。随
针对三维坐标转换模型参数估计的核心是旋转矩阵的表示方法这一客观事实,该文通过对现有三维坐标转换模型中不同旋转矩阵的表示方法进行研究,依据任何一个方阵都可以惟一地分解为一个对称矩阵与一个反对称矩阵之和的矩阵理论,提出了一种使用反对称矩阵表示旋转矩阵的新方法,并详细推导了基于布尔莎模型的三维坐标转换算法——平方根矩阵法;最后,根据文献算例对该方法进行实验分析。实验结果表明,该算法适用于大旋转角,且相较
小麦(Triticum aestivum)在正常的生长过程中,经常受到干旱胁迫的影响。研究表明,非编码RNA直接或者是间接参加了小麦对干旱胁迫的响应。通过高通量测序技术得知,circRNA是一种缺失5末端帽子和3末端poly(A)尾巴的具闭环结构的非编码RNA。在人类、动物和植物中,circRNA作为miRNA的海绵,以“解除”miRNA对其靶基因的抑制作用。然而,迄今为止没有关于干旱胁迫下小麦叶
针对组装式全球定位系统浮标因每次加载设备不同,浮标体质心与吃水存在变化的问题,该文提出一种借助全球定位系统动态后处理和验潮仪的浮标全球定位系统天线高的动态标定
纳米碳管作为一种新型碳材料,具有很好的力学性能、独特的电磁学性质、光学性质和很强的热稳定性,在纳米材料、纳米生物学、纳米化学等方面具有潜在的应用价值。要使纳米碳管走出实验室,真正投入到应用领域,必须首先认识其生长规律和影响因素,以及对纳米碳管的形状、分布、直径等的控制技术。本课题采用催化化学气相沉积法制备多壁纳米碳管,主要考察催化剂种类、催化剂制备条件、碳源气种类和反应条件对纳米碳管产量和形貌的影
红枣产业是近几年来新疆发展最快、覆盖最广、惠民成效最显著的一项林果产业,对农民增收有重要意义。上海是中国高端消费的代表,调查上海市消费者红枣消费的偏好,能够为新疆
Ⅱ型猪圆环病毒(PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的主要病原,同时与猪群中许多传染病密切相关,严重威胁养猪业的健康发展。PCV2的致病机制目前仍不十分清楚,这与尚未
针对利用全球导航卫星系统反射信号研究测站地表环境参数已成为一个新兴的研究课题这一现状,该文基于全球定位系统信噪比与信号振幅的变化特征,给出了基于全球定位系统多路径信号的全球定位系统多径反射技术用于雪深探测的基本原理。为了验证算法的有效性,利用美国PBO网络中P360站离散20d的全球定位系统原始观测数据进行雪深探测的反演实验。实验结果表明:全球定位系统多径反射技术反演雪深值与实测雪深值吻合较好,误
大型电视系列纪录片《绽放的力量——中国电视艺术回眸》第一次以电视影像为载体,系统回顾了中国电视艺术从1958年诞生至201 1年以来的发展历史。本期“评论聚焦”栏目刊发了