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由茄链格孢引起的早疫病是马铃薯生产中重要病害，分生孢子是茄链格孢侵染、传播及致病的基础。本文在茄链格孢全基因组测序的基础上，对产孢相关基因flbA进行功能研究。明确flbA基因在茄链格孢病菌产孢过程中的功能，为阐明早疫病菌无性产孢机制以及寻找病害防治新靶标提供理论依据。具体研究结果如下:
1.克隆得到了flbA基因。利用flbA基因的特异性引物从茄链格孢HWC-168的基因组DNA中克隆得到了全长为1762bp的flbA基因，该基因有3个内含子，编码483个氨基酸。通过NCBI下载不同丝状真菌中flbA的氨基酸序列，经过比对发现茄链格孢的fqbA基因与其他真菌的flbA基因的氨基酸序列的C端同源性较高，其中与链格孢同源性最高，达到99.17％。
2.构建得到了fqbA基因突变体。利用融合PCR技术，构建得到了含有潮霉素抗性基因的flbA同源重组片段，然后将同源重组片段通过PEG介导的原生质体转化方法转化茄链格孢HWC-168的原生质体，获得了3个缺失flbA基因的转化子。通过普通PCR和Southern杂交技术对得到的转化子进行了验证，确认潮霉素抗性基因为单拷贝插入，并获得3株缺失flbA基因的突变菌株。成功构建了恢复载体，并通过原生质体转化缺失bA基因突变菌株获得恢复转化子，通过PCR验证获得恢复菌株。
3.明确了flbA基因的功能。在产孢量、分生孢子形态等方面比较分析了野生菌株、ΔflbA突变体和恢复菌株的差异。结果发现，与野生菌株和恢复菌株相比，ΔflbA突变体产孢量大幅下降，分生孢子形态并未改变。野生菌株的产孢量为1.31×103个/cm2，ΔflbA突变体的产孢量为17.30个/cm2，恢复菌株的产孢量为1.35×103个/cm2，ΔflbA突变体的产孢量比野生菌株减少了98.68％。在菌落表型、菌丝形态、生长速度及菌丝致病力等方面比较分析了野生菌株、ΔflbA突变体和恢复菌株的差异。结果表明，ΔflbA突变体的菌落颜色发白，菌丝呈绒毛状且分枝减少，菌丝的生长速度与野生菌株一致。野生菌株、ΔflbA突变体和恢复菌株的菌丝接种的马铃薯叶片均出现同心轮纹状病斑，病斑大小无显著性差异，其中野生菌株病斑平均直径为1.04cm;ΔflbA突变体病斑平均直径为1.19cm;恢复菌株病斑平均直径为0.99cm。
1.克隆得到了flbA基因。利用flbA基因的特异性引物从茄链格孢HWC-168的基因组DNA中克隆得到了全长为1762bp的flbA基因，该基因有3个内含子，编码483个氨基酸。通过NCBI下载不同丝状真菌中flbA的氨基酸序列，经过比对发现茄链格孢的fqbA基因与其他真菌的flbA基因的氨基酸序列的C端同源性较高，其中与链格孢同源性最高，达到99.17％。
2.构建得到了fqbA基因突变体。利用融合PCR技术，构建得到了含有潮霉素抗性基因的flbA同源重组片段，然后将同源重组片段通过PEG介导的原生质体转化方法转化茄链格孢HWC-168的原生质体，获得了3个缺失flbA基因的转化子。通过普通PCR和Southern杂交技术对得到的转化子进行了验证，确认潮霉素抗性基因为单拷贝插入，并获得3株缺失flbA基因的突变菌株。成功构建了恢复载体，并通过原生质体转化缺失bA基因突变菌株获得恢复转化子，通过PCR验证获得恢复菌株。
3.明确了flbA基因的功能。在产孢量、分生孢子形态等方面比较分析了野生菌株、ΔflbA突变体和恢复菌株的差异。结果发现，与野生菌株和恢复菌株相比，ΔflbA突变体产孢量大幅下降，分生孢子形态并未改变。野生菌株的产孢量为1.31×103个/cm2，ΔflbA突变体的产孢量为17.30个/cm2，恢复菌株的产孢量为1.35×103个/cm2，ΔflbA突变体的产孢量比野生菌株减少了98.68％。在菌落表型、菌丝形态、生长速度及菌丝致病力等方面比较分析了野生菌株、ΔflbA突变体和恢复菌株的差异。结果表明，ΔflbA突变体的菌落颜色发白，菌丝呈绒毛状且分枝减少，菌丝的生长速度与野生菌株一致。野生菌株、ΔflbA突变体和恢复菌株的菌丝接种的马铃薯叶片均出现同心轮纹状病斑，病斑大小无显著性差异，其中野生菌株病斑平均直径为1.04cm;ΔflbA突变体病斑平均直径为1.19cm;恢复菌株病斑平均直径为0.99cm。